Методические указания МУК 4.1.2337-08 "Определение остаточных количеств метомила в воде, почве, яблоках, винограде, яблочном и виноградном соках методом газожидкостной хроматографии" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 15 февраля 2008 г.)

Методические указания МУК 4.1.2337-08
"Определение остаточных количеств метомила в воде, почве, яблоках, винограде, яблочном и виноградном соках методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 15 февраля 2008 г.)

Введены в действие с 10 апреля 2008 г.
Введены впервые

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Метомила в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг в почве, яблоках, ягодах винограда, яблочном и виноградном соке, и 0,01 - 0,1 в воде.

Метомил.

S-метил М-(метидкарбомоил-окси)тиоацетамидат (ИЮПАК).

Структурная формула:

"Структурная формула метомила"

Эмпирическая формула:

Молекулярная масса: 162,2.

Химически чистый Метомил представляет собой белое кристаллическое вещество со слабым запахом серы.

Давление паров 0,72 мПа (при 25°С).

Температура плавления 78 - 79°С.

Коэффициент распределения н-октанол - вода: . Растворимость в воде составляет 57,9 при 25°С.

Растворимость в органических растворителях ( при 20°С): метанол - 1000; ацетон - 730,0; этанол - 420; изопропанол - 220; толуол - 30,0 при 25°С.

Стабилен в воде в течение 30 дней при pH 5 и 7; около 30 дней при pH 9. Термически и фотостабилен.

Быстро разрушается в почве с 4 - 8 дней.

Краткая гигиеническая характеристика:

Метомил относится к чрезвычайно опасным веществам по острой оральной ( для крыс - 34 мг/кг) и по ингаляционной токсичности ( для крыс 300 ); умеренно опасным по раздражающему действию на кожу и слизистые оболочки и дермальной токсичности ( для кроликов > 2000 мг/кг).

В России гигиенические нормативы не установлены.

Область применения:

Метомил - системный инсектицид и акарицид с контактнокишечным действием из группы карбаматов, ингибитор ацетилхолинэстеразы.

Применяется в качестве инсектицида широкого спектра действия для борьбы с вредителями плодовых и цитрусовых культур, винограда, хлопчатника, кукурузы, риса, табака, овощных культур при норме расхода 0,2 - 0,4 кг д.в./га.

Рекомендуется для применения в России в качестве инсектицида на винограднике и в яблоневом саду с максимальной нормой расхода 2,2 л/га до 6-ти обработок за сезон.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в Таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализируемый объект	Диапазон опрделяемых концентраций мг/кг	Показатель точности (граница относительной погрешности) , % Р=0,95	Стандартное отклонение повторяемости, , %	Предел повторяемости, г, %	Предел воспроизводимости, R, %
Вода	0,01 - 0,1	50	3,7	9	11
Почва	0,1 - 0,5	25	4,0	11	12
	0,05 - 0,1	50	3,3	9	11
Яблоки	0,1 - 0,5	25	5,4	15	18
	0,05 - 0,1	50	3,6	10	12
Яблочный сок	0,1 - 0,5	25	4,3	12	14
	0,05 - 0,1	50	4,1	12	14
Виноград	0,1 - 0,5	25	6,0	17	20
	0,05 - 0,1	50	5,6	16	19
Виноградный сок	0,1 - 0,5	25	4,5	13	15
	0,05 - 0,1	50	5,8	16	19

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в Таблице 2.

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение S, %	Доверительный интервал среднего результата, , %
1	2	3	4	5	6
Вода	0,01	0,01 - 0,1	83,0	0,73	1,27
Почва	0,05	0,05 - 0,5	78,9	0.81	1,33
Яблоки	0,05	0,05 - 0,5	79,8	1,11	1,85
Яблочный сок	0,05	0,05 - 0,5	80,5	0,92	1,55
Виноград	0,05	0,05 - 0,5	79,7	1,25	2,08
Виноградный сок	0,05	0,05 - 0,5	80,6	1,04	1,75

2. Метод измерений

Метод основан на определении Метомила методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после экстракции веществ органическим растворителем, очистки экстрактов путем перевода соединений в ионизированную форму, последующего перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями и дополнительной очистки на колонках с Флоризилом.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Весы аналитические , фирма "OHAUS".

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности г V600, "ACCULAB".

Колбы мерные вместимостью 10, 50, 100 и 1000 , ГОСТ 1770-74;

Микрошприц Гамильтон, вместимостью 10 ;

Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 , ГОСТ 20292-74.

Хроматограф газовый "Кристалл 5000.1" с термоионным детектором (ТИД) с пределом детектирования по азоту в азобензоле и приспособлениями для капиллярной колонки.

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100 и 250 , ГОСТ 1770.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Аналитический стандарт Метомила с содержанием 99,6% д.в. (фирма Дюпон де Немур);

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, х.ч., ТУ 6-09-06-1092-83;

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72;

Н-гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78;

Гелий, очищенный марки "А", ТУ-51-940-80.

Метилен хлористый, х.ч., ГОСТ 19433-88.

Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Флоризил для колоночной хроматографии с размером частиц 60-80 меш, фирма "Мерк".

Стандартный раствор Метомила в ацетоне - 1 (хранить в холодильнике, срок годности 120 суток).

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания проб TYP LT1 фирмы "SKLO UNION".

Банки с крышками для экстракций на 250 , полипропилен, кат. N 3120-0250, NALGENE.

Воронки химические для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75;

Воронки делительные на 250 , ГОСТ 10054-75;

Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480;

Концентраторы грушевидные на 100 и 250 , HILI 29 КГУ - 100 (250) ГОСТ 10394-72.

Колонка хроматографическая, капиллярная кварцевая CP SIL 8CD DF=0,25UM (5% дифенил и 95% диметилполисилоксан, аналог НР-5), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма VARIAN.

Стаканы химические емкостью 50, 100 и 250 , ГОСТ 25336-82 Е.

Насос вакуумный диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport.

Фильтры бумажные "красная лента", ТУ 6-09-2678-77.

Центрифуга MPW-350e с набором полипропиленовых банок емкостью 200 мл.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.9. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К подготовке проб допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха ()°С и относительной влажности не более 80%;

выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

7.1.1. Подготовка хроматографической колонки, заполненной Флоризилом, для очистки проб

На дно пластиковой хроматографической колонки (высота 10 см, диаметр 1,5 см) помещают пробочку из стекловаты и заполняют колонку Флоризилом на высоту 5 см. На слой Флоризила насыпают слой безводного сернокислого натрия толщиной 1,0 см. Колонку промывают последовательно 15 ацетона (остаток растворителя в колонке отжимают) и 15 гексана, смывы отбрасывают. После промывки колонка готова к работе.

7.1.2. Проверка хроматографического поведения Метомила на колонках с Флоризилом

При отработке методики или поступлении новой партии Флоризила проводят изучение поведения Метомила на колонке. В стакан емкостью 50 помещают 1 стандартного раствора Метомила в ацетоне с концентрацией. 10 , добавляют 4 гексана, перемешивают содержимое и наносят на колонку. Промывают колонку 10 смеси гексан: ацетон - 4:1, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 25 смеси гексан: ацетон - 1:2, отбирая последовательно по 5 элюента. Каждую фракцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°С досуха.

Сухой остаток в концентраторах растворяют в 1 ацетона и вводят в хроматограф 1 . По результатам обнаружения Метомила в каждой фракции определяют объем смеси гексан: ацетон - 1:2, необходимый для полного вымывания Метомила.

7.2. Приготовление рабочих растворов

7.2.1 Приготовление 2% раствора безводного сульфата натрия

Навеску 2 г безводного сульфата натрия вносят в мерную колбу вместимостью 1 , добавляют 600-700 дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения соли и доводят водой до метки.

7.3. Приготовление стандартных растворов

Навеску 50 мг Метомила (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 50 , растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор N 1, концентрация 1 ). Раствор хранится в холодильнике около 120 суток.

Методом последовательного разбавления исходного раствора N 1 ацетоном готовят рабочие растворы Метомила с концентрацией 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 10,0 для построения калибровочного графика и для внесения в образцы, которые могут храниться в холодильнике не более 30 суток.

7.4. Построение градуировочного графика

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Метомила в растворе (), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 0,5; 1,0; 2,5; 5,0 .

В испаритель хроматографа вводят по 1 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ от концентрации Метомила в растворе в (рисунок 1).

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", N 2051-79 от 21.08.79 г. а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 17.4.3.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 26950-89 "Почвы. Отбор проб", ГОСТ 25896-83 "Виноград свежий столовый. ТУ", ГОСТ 25892-83Е "Сок виноградный натуральный. ТУ", ГОСТ 27572-87 "Яблоки свежие для промышленной переработки. ТУ", ГОСТ 656-79 "Соки плодовые и ягодные натуральные".

Пробы воды и соков хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре +4°С не более 10 суток. Пробы винограда хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4°С не более суток. Для длительного хранения пробы почвы, яблок и винограда замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18°С до 2-х лет.

9. Выполнение определения

9.1. Вода

9.1.1. Экстракция Метомила из анализируемой пробы

Пробу воды объемом 100 наливают в делительную воронку емкостью 250 (при сильном загрязнении фильтруют через бумажный фильтр "красная лента"), добавляют 5 г хлористого натрия (одну чайную ложку), встряхивают воронку до полного растворения соли, приливают 50 хлористого метилена и встряхивают воронку в течение 2 минут. После разделения слоев нижний слой сливают в концентратор емкостью 250 через воронку с безводным сульфатом натрия. Экстракцию повторяют еще два раза порциями хлористого метилена по 50 мл каждая, собирая хлористый метилен в концентратор. Хлористый метилен выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40°С.

Далее проводят очистку пробы на колонках с Флоризилом.

9.1.2. Очистка пробы на колонках с Флоризилом

Сухой остаток в концентраторе разводят в 1 ацетона, добавляют 4 гексана, перемешивают содержимое и наносят на колонку с Флоризилом, подготовленную как указано в разделе 7.1.1. Промывают колонку 10 смеси гексан:ацетон - 4:1, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 5 смеси гексан:ацетон - 1:2, смыв отбрасывают. Пропускают через колонку 20 смеси гексан:ацетон - 1:2, собирая элюат в концентратор емкостью 100 , содержимое концентратора выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40°С. Сухой остаток в концентраторе разводят в 2 ацетона и вводят в хроматограф 1 пробы.

9.2. Почва

9.2.1. Экстракция и предварительная очистка

Навеску 20 г измельченной пробы помещают в центрифужные полипропиленовые банки объемом 250 , смачивают почву 10 дистиллированной воды и выдерживают 20 мин. Затем в банку приливают 50 ацетонитрила и встряхивают в течение 30 мин. По окончании встряхивания экстракт центрифугируют 10 мин со скоростью 2000 об/мин и фильтруют в концентратор емкостью 250 через стеклянную воронку с бумажным фильтром "красная лента". Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя каждый раз по 50 ацетонитрила и, встряхивая смесь в течение 30 мин. Экстракты после центрифугирования отфильтровывают в тот же концентратор. Содержимое концентратора упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре 40°С.

Водный остаток в концентраторе разбавляют 50 2% раствора безводного сульфата натрия, перемешивают содержимое концентратора и переносят в делительную воронку емкостью 250 . Обмывают концентратор еще раз 50 безводного сульфата натрия и сливают в ту же делительную воронку. Приливают в делительную воронку 50 хлористого метилена и встряхивают воронку в течение 2 минут. После разделения слоев нижний слой сливают в концентратор через воронку с безводным сульфатом натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 хлористого метилена. Хлористый метилен выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40°С.

Далее проводят очистку на колонках с Флоризилом, как указано в разделе 9.1.2. Сухой остаток в концентраторе разводят в 2 ацетона и вводят в хроматограф 1 пробы.

9.3. Яблоки и ягоды винограда

9.3.1. Экстракция и предварительная очистка

Навеску 20 г измельченной пробы помещают в полипропиленовые банки объемом 250 , приливают 50 ацетонитрила и встряхивают в течение 30 мин. По окончании встряхивания экстракт фильтруют в делительную воронку емкостью 250 через стеклянную воронку с бумажным фильтром "красная лента". Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя каждый раз по 50 ацетонитрила и, встряхивая смесь в течение 15 мин. Экстракты отфильтровывают в ту же делительную воронку.

К объединенному экстракту в делительную воронку приливают 30 гексана и встряхивают в течение минуты. После разделения слоев нижний слой сливают в стакан емкостью 200 , а гексан отбрасывают. Экстракт возвращают в делительную воронку и промывают его еще раз 30 гексана.

Промытый экстракт сливают в концентратор емкостью 250 и упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре 40°С.

Водный остаток в концентраторе разбавляют 50 2% раствора безводного сульфата натрия, перемешивают содержимое концентратора и переносят в делительную воронку емкостью 250 . Обмывают концентратор еще раз 50 2% раствора безводного сульфата натрия и сливают в ту