Определение токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек* (утв. заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 31 декабря 1987 г. N 4541-87) (документ не действует)

Определение токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек*
(утв. заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 31 декабря 1987 г. N 4541-87)

Санитарные правила предназначаются для контроля безвредности зерна в лабораториях республиканских, краевых и областных СЭС.

В условиях повышенной влажности в период созревания хлебных злаков (при дождливом лете и на поливных землях) возможно поражение зерновых культур, особенно ржи и пшеницы, микроскопическими грибами. Грибы могут также развиваться в зерне запоздалой уборки, а также убранном своевременно, но недостаточно просушенном или хранившемся при высокой влажности. Отдельные представители микроскопических грибов, развиваясь на зерне, образуют продукты жизнедеятельности - микотоксины, ядовитые для человека, вследствие чего зерно приобретает токсические свойства. Особую опасность представляют грибы рода Fusarium. Термическая обработка (выпечка хлебов, варка пищи) не разрушает ядовитые вещества, образованные фузариями. Поэтому употребление в пищу фузариозного зерна и продуктов его переработки может стать причиной заболевания людей (алиментарно-токсическая алейкия, расстройства функции кишечного тракта и др.). Поражение зерна грибами рода Fusarium обычно приводит к появлению розовой окраски оболочек отдельных зерен, так как многие представители фузариев при своем росте на зерне образуют наряду с токсинами красно-розовый пигмент. Поэтому розово окрашенные оболочки рассматриваются как косвенный признак фузариозного поражения. Однако розовую окраску оболочек зерна могут формировать и другие микроскопические грибы помимо фузариев.

Исследования, проведенные в Институте питания АМН СССР, показали, что токсическими свойствами может обладать не только розово окрашенное зерно с признаками фузариоза, но также зерно без признаков фузариозного поражения, если содержание в испытуемом образце розово окрашенных зерен превышает 3%.

В связи с этим для решения вопроса о путях использования розово окрашенного зерна без признаков фузариоза все партии зерна с содержанием зерен с розово окрашенными оболочками свыше 3% должны быть исследованы на токсичность.

Поскольку в зерне с розовой окраской оболочек, пораженном микроскопическими грибами, может накапливаться целый ряд токсических грибных метаболитов, природа которых не всегда известна, для выявления токсичности такого зерна необходимо использовать биологические методы определения, позволяющие выявить в зерне весь комплекс токсических компонентов, независимо от его химической природы.

Биологические методы исследования токсичности зерна с розовой окраской оболочек включают биопробы с культурами дрожжей - Saccharomyces lactis ВКМУ-459, бактерии Bacillus megaterium ВКМВ-44 и испытания на растущих крысятах.

В качестве микромодели для выявления фузариотоксинов в зерне используют штамм дрожжей Saccharomyces lactis ВКМУ-459, чувствительный к Т-2 токсину.

Культура Bacillus megaterium ВКМВ-44 чувствительна к действию афлатоксинов, а также к действию метаболитов грибов рода Aspergillus - продуцентов охратоксинов.

Биопробы с дрожжами Saccharomyces lactis ВКМУ-459 и бактериями Bacillus megaterium ВКМВ-44 позволяют быстро провести предварительную проверку наличия у зерна токсических свойств, связанных с возможным загрязнением вышеперечисленными микротоксинами. В случае обнаружения токсичности по биопробам необходимо провести анализ зерна на содержание конкретных микотоксинов химическими методами.

В связи с тем что розово окрашенное зерно может содержать токсические метаболиты грибов неизвестной природы, кроме проверки с дрожжевыми и бактериальными тестами токсичность зерна должна быть проверена в опытах на высших животных. В качестве животных, чувствительных к действию комплекса токсических компонентов розово окрашенного зерна, предлагаются крысята вместо рекомендованных ранее голубей, так как голуби избирательно чувствительны только к фузариотоксинам.

Исследования на штаммах бактерий и дрожжей должны проводиться в бактериологической лаборатории СЭС, определение токсичности зерна в опытах на крысятах должно выполняться в токсикологической лаборатории СЭС.

Определение токсичности розово окрашенного зерна следует проводить по прилагаемой схеме.

1. Схема проведения исследования

Проба зерна (500 г)

350 г смолоть

2. Посуда. Аппаратура. Реактивы

Посуда

1. Чашки Петри (диаметр 90-100 мм), ГОСТ 25336-82

2. Пипетки на 1 и 10 мл, градуированные, ГОСТ 28336-82

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Имеется в виду "ГОСТ 25336-82"

3. Микропипетки на 0,1 мл градуированные

4. Пробирки (диаметр 15-16 мм), ГОСТ 25336-82

5. Банки стеклянные с притертой пробкой емк. 1,0 л

6. Фарфоровые чашки (диаметр - 13 мм)

7. Стеклянные палочки

8. Колбы конические емк. 50, 100, 250 и 750 мл, ГОСТ 25336-82

9. Воронки стеклянные (диаметр - 10 мм), ГОСТ 25336-82

10. Пробойник металлический (диаметр 6-7 мм)

11. Микробиологическая петля

Аппаратура

12. Горелка спиртовая или газовая

13. Весы торговые со стрелками на 200 г

14. Весы технические

15. Кофемолка или лабораторная мельница

16. Оптический стандарт мутности ГИСК им. Тарасевича

17. Ареометр АСТ-2

18. Бумага фильтровальная лабораторная, ГОСТ 12026-76

19. Шприц медицинский на 1 мл

20. Иглы для шприца N 11 с напаянной на конце оливой

21. Ножницы

22. Скальпель глазной

23. Пинцеты - глазной и анатомический

24. Холодильник бытовой

25. Термостат на и

Реактивы

26. Глюкоза х.ч., ГОСТ 975-75

27. Агар микробиологический, ГОСТ 17206-71

28. Подсолнечное масло пищевое

29. Хлороформ медицинский

30. Пикриновая кислота, насыщенный водный раствор

31. Спиртовая настойка йода медицинская

32. Спирт этиловый ректификованный, ГОСТ 18300-72

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 55878-2013 "Спирт этиловый технический гидролизный ректификованный. Технические условия", утвержденный приказом Росстандарта от 22 ноября 2013 г. N 2057-ст

33. Сусло пивное

34. Хлористый натрий, ГОСТ 4233-77

35. Натрий едкий очищенный, ГОСТ 11078-78 - 10%-ный раствор

3. Питательные среды

1. Мясопептонный агар с глюкозой:

Мясопептонный бульон - 1000 мл

агар - 20 г

Стерилизовать в течение 20 мин при 120°С.

В остуженный до 60°С мясопептонный агар ввести 25 мл 40%-ного стерильного раствора глюкозы, размешать и использовать для постановки опыта с Bacillus megaterium или разлить в стерильные пробирки по 5 мл для приготовления скошенного агара. Пробирки со средой выдержать 24 ч в термостате при 37°С, отбраковать проросшие, остальные хранить в холодильнике не более 1 мес. и использовать для пересева культуры Bacillus megaterium.

2. Картофельный агар:

Картофель тертый - 200 г

Агар - 20 г

Вода водопроводная - 1000 мл

Картофель варят 1 ч, фильтруют через марлю, доливают водой до первоначального объема, добавляют агар. Стерилизуют 30 мин при 120°С и разливают по 5 мл в стерильные пробирки для приготовления скошенного агара. Хранят в холодильнике не более 1 мес., используют для пересева культуры Bacillus megaterium.

3. Сусло-агар:

Пивное сусло 14 Ball - 100 мл

Вода водопроводная - 100 мл

Агар - 4 г

В пивном сусле определяют содержание сахара ареометром и разводят водопроводной водой до нужной концентрации (7 Ball). Определяют рН и доводят 10%-ным раствором NaOH до 5,8-6,0. Добавляют агар по 2 г на 100 мл разведенного сусла. Стерилизуют 30 мин при 112°С. Перед использованием в опыте с дрожжами расплавить на кипящей водяной бане, охладить до 50°С и разлить в чашки Петри по 20 мл или в стерильные пробирки для приготовления скошенного агара. Хранить пробирки со средой в холодильнике не более 1 мес. и использовать для пересева дрожжей Saccharomyces lactis ВКМУ-459.

4. Тест-объекты

1. Культура дрожжей - Saccharomyces lactis - ВКМУ-459.

Культуру засевают штрихом на скошенный сусло-агар в пробирки микробиологической петлей, обожженной в пламени горелки, инкубируют при 28°С 24 ч. Выросшую односуточную культуру хранят в холодильнике и пересевают на свежие косяки сусло-агара 1 раз в мес.

2. Культура бактерий - Bacillus megaterium ВКМВ-44.

Культуру засевают штрихом на скошенный картофельный агар в пробирки микробиологической петлей, обожженной в пламени горелки, и инкубируют при 28°С 24 ч. Выросшую односуточную культуру хранят в холодильнике и пересевают на свежие косяки картофельного агара через каждые 2 недели.

5. Отбор зерна и его паспортизация

Пробы отбирают от каждой поступающей партии зерна в соответствии с ГОСТ 13586.3-83.

Отобранные образцы должны быть паспортизированы. На этикетках указывается:

а) место отбора зерна (область, район, колхоз, совхоз и т.д.);

б) наименование зерновых культур (пшеница, рожь, просо и др.);

в) количество зерна, от которого взята проба (или размер партии);

г) содержание розово окрашенных зерен;

д) откуда взят образец (снят на корню, из валков, из зернохранилища и т.д.);

е) дата отбора пробы;

ж) вес взятого образца;

з) фамилия ответственного за отбор проб.

Отобранные образцы направляют на исследование в областную, краевую и республиканскую санитарно-эпидемиологическую станции.

6. Подготовка материала для исследования

Из поступившего на исследование образца зерна отбирают среднюю пробу около 500 г, подсушивают ее при температуре 40-50°С, из них 350 г измельчают на лабораторной мельнице или кофемолке в течение 2 мин, делят на две порции по 100 г ("А") и 250 г ("Б") и помещают в две стеклянные банки с притертыми пробками. Порции заливают хлороформом в количестве: порцию "А" - 300 мл, порцию "Б" - 800 мл, взбалтывают, оставляют на 24 ч. Отфильтровывают через бумажный фильтр порцию "А" в фарфоровую чашку, порцию "Б" - в банку с притертой пробкой емкостью 1 л. Для приготовления экстрактов зерна используют чисто вымытую нестерилизованную посуду и нестерильные фильтры. Выпаривают порции "А" и "Б" каждую отдельно в фарфоровых чашках в токе воздуха при комнатной температуре до исчезновения следов хлороформа, определяемых по реакции с йодом.

Примечание. Постановка йодной реакции на остаточный хлороформ в экстракте зерна: на дно пустой фарфоровой чашки наносят стеклянной палочкой каплю выпаренного экстракта и каплю 5%-ного спиртового раствора йода. Появление розовой окраски свидетельствует о присутствии хлороформа и необходимости дальнейшего выпаривания. Отсутствие порозовения свидетельствует о полном удалении хлороформа из экстракта.

Полученный таким образом сгущенный экстракт порции "А" используют для постановки опыта с культурой дрожжей Saccharomyces lactis ВКМУ-459 и бактерий Bacillus megaterium. Если остаток экстракта затвердел, его слегка разводят добавлением 0,4 мл стерильного подсолнечного масла.

Сгущенный экстракт из порции "Б" разводят 50 мл стерильного подсолнечного масла и получают масляный экстракт зерна, который хранят в холодильнике в стерильных колбочках емкостью 50 мл и используют для введения экспериментальным крысятам.

В качестве контроля готовят, как описано выше, для порции "Б" масляный экстракт доброкачественного зерна нормальной окраски.

7. Определение токсичности зерна при помощи чувствительного к фузариотоксинам штамма дрожжей Saccharomyces lactis ВКМУ-459

Для проведения исследования культуру дрожжей из исходной пробирки, хранящейся в холодильнике, пересевают штрихом микробиологической петлей, обожженной в пламени горелки, на скошенный сусло-агар в пробирки и инкубируют при температуре 28°С в течение 24 ч.

Затем в пробирку с выросшей односуточной культурой дрожжей наливают 10 мл стерильной водопроводной воды и стерильной петлей взбалтывают дрожжи в воде до получения суспензии. Суспензию переносят стерильной пипеткой на 5 мл в пустую стерильную пробирку и разводят стерильной водой до мутности, соответствующей 5 единицам мутности (5 млн клеток в 1 мл) стандарта мутности. По 2 мл приготовленной суспензии дрожжевых клеток наливают в заранее приготовленные стерильные чашки Петри (2 мл суспензии на 1 чашку) и заливают расплавленным и охлажденным до 50°С сусло-агаром из расчета 20 мл на чашку и тщательно перемешивают. В застывшей пластинке агара пробочным пробойником диаметром 6-7 мм, обработанным методом фламбирования, делают лунки по 3 лунки на чашку согласно схеме. В лунку вносят по 0,1 мл экстракта порции "А" стерильными микропипетками. Для каждого образца закапывают две лунки. В качестве контроля в третью лунку вносят стерильное подсолнечное масло. Чашки, не перевертывая вверх дном, ставят в термостат и инкубируют сутки при 28°С. Отмечают появление зон угнетения роста дрожжей вокруг лунок. Для каждой пробы зерна проводят два параллельных исследования. В контроле стерильные зоны отсутствуют. При наличии стерильных зон в контроле опыт повторяют со свежей культурой.

Далее зерно исследуют в опытах с Bacillus megaterium и на крысятах.

8. Определение контаминации зерна микотоксинами при помощи чувствительного штамма бактерий Bacillus megaterium ВКМВ-44

Для проведения анализа культуру бактерий Bacillus megaterium ВКМВ-44 на картофельном агаре из пробирки, хранящейся в холодильнике, пересевают штрихом микробиологической петлей, обожженной в пламени горелки, на скошенный МПА с 1% глюкозы или картофельный агар** и инкубируют при температуре 28°С 24 ч. Готовят суспензию клеток из выросшей односуточной культуры бактерий в стерильном физиологическом растворе NaCl (0,85%) по эталону мутности N 5, что соответствует 5 единицам мутности стандарта мутности.

В расплавленный и охлажденный до 50°С МПА с 1% глюкозы или картофельный агар вносят приготовленную клеточную суспензию в количестве 15 мл на 100 мл агара и разливают в приготовленные чашки Петри из расчета 20 мл на чашку. В застывшей пластинке агара пробочным пробойником диаметром 6-7 мм, обработанным методом фламбирования, делают лунки, по 3 лунки на чашку согласно схеме. В две лунки вносят по 0,1 мл экстракта порции "А" стерильными микропипетками на 0,1 мл.

В третью лунку в качестве контроля вносят стерильное подсолнечное масло. Чашки, не перевертывая вверх дном, ставят в термостат и инкубируют сутки при 28°С. Отмечают появление зон угнетения роста бактерий вокруг лунок.

В контроле стерильные зоны вокруг лунок не образуются. В случае появления стерильных зон вокруг лунок в контроле опыт повторяют со свежей культурой бактерий.

Затем зерно исследуют в опытах с крысятами.

9. Биологическая проба на крысятах

Используют молодых крысят линии Вистар, самцов весом 50-70 г в количестве 6-7 животных на каждую пробу зерна.

Животных осматривают, отбраковывают больных, взвешивают, метят пикриновой кислотой, в соответствии с меткой записывают номер животного, помещают по 5 штук в клетку. Клетки маркируют - "опыт", "контроль", ставят дату начала опыта.

Ежедневно крысятам вводят в пищевод через рот по 0,5 мл масляного экстракта исследуемой пробы зерна. Для введения используют медицинский шприц, рассчитанный на дозу объемом 1 мл, и иглу для шприца N 11, на конец которой напаивается олива. Экстракт вводят ежедневно 1 раз в сутки утром натощак, для чего с вечера убирают из клетки обычный виварный корм, оставляя воду для питья. После введения экстракта ставят в клетку виварный корм. Длительность опыта с введением масляного экстракта зерна 8 сут. В качестве контроля используют 6-7 крысят того же возраста и веса, которым вводят в течение опыта ежедневно натощак по 0,5 мл масляного экстракта, приготовленного из доброкачественного зерна нормальной окраски, а также в качестве дополнительного контроля отсаживают 7 животных, которым не делают никаких введений (контроль - интактные крысята).

Ежедневно следят за общим состоянием животных, отмечают вялость, расстройства пищеварения, тремор, взъерошенность шерсти как симптом возможного токсического действия испытуемых образцов зерна.

Признаком острой токсичности служит гибель животного в течение опытного периода.

При отсутствии острого токсического действия экстрактов зерна доброкачественность последнего оценивается на основе комплекса признаков, включающих клинические симптомы, весовые характеристики животных и состояние их органов.

Для получения перечисленных сведений по окончании опыта контрольных животных натощак взвешивают, забивают методом декапитации, вскрывают и исследуют визуально состояние органов, сначала у контрольных животных, затем у опытных. Отклонения регистрируются по сравнению с контрольными животными. Отмечают светлую окраску или желтизну, зернистую консистенцию печени, воспаление легких, вздутость кишечника, увеличение пейеровых бляшек в тонкой кишке и увеличение размеров мезентерального брыжеечного лимфоузла, гиперемированные кровеносные сосуды. Печень, тимус и селезенку взвешивают.

При визуально обнаруживаемых отклонениях в печени морфологические исследования выявляют наличие жировой и белковой дистрофии и другие нарушения микроструктуры органов; при визуально выявляемых отклонениях в лимфоузле морфологические исследования обнаруживают наличие кровоизлияний в этом органе, обеднение клеточного состава в фолликулярных центрах и другие нарушения микроструктуры; при визуальном осмотре пейеровых бляшек в тонкой кишке при токсическом действии наблюдаются увеличенные или уменьшенные размеры по сравнению с контролем, резкая гиперемия сосудов и изменения морфологической структуры органа; визуально обнаруживаемые изменения в кишечнике также сопровождаются нарушениями микроструктуры крипт, эпителия, субэпителиальных слоев с выраженной их инфильтрацией круглоклеточными элементами; кроме того, у этих животных обнаруживаются морфологическими методами нарушения в структуре тимуса, селезенке и почек. Морфологические исследования подтверждают правомочность суждения о наличии токсического действия по визуально выявляемым признакам патологических отклонений в органах забитых животных.

Результаты испытаний регистрируются в журнале по форме N 1 и 2.

1. На основе полученных данных учитывают количество погибших животных и их процент; если гибели животных не отмечалось, то записывают - 0.

2. На основе взвешивания животных рассчитывают прирост массы тела в граммах и процентах к исходному весу:

а) прирост массы в г = масса конечная - масса начальная;

б) .

Пример. Нач. масса 50 г, конечная - 65 г

.

Рассчитывают среднее арифметическое значение массы тела и прирост массы у всех животных за опытный период.

3. Подсчитывают средние весовые показатели массы печени и селезенки и высчитывают их относительную массу по следующей формуле:

Пример. Вес крысенка перед забоем 70 г

вес печени 3,5 г

г на 100 г тела.

4. Подсчитывают количество животных, у которых были обнаружены клинические симптомы заболевания и при вскрытии визуально обнаружены изменения в вышеперечисленных органах, вычисляют процент отклонения. По формам 1 и 2 заполняют и результаты обследования контрольных животных.

5. Затем составляют суммарную таблицу по формам 3 и 4, где приводят полученные данные для всех исследованных опытных образцов зерна с розовой окраской оболочек и образцов контрольного зерна нормальной окраски.

Форма N 1. Регистрация результатов испытаний зерна на токсичность на крысятах

Дата опыта:						Образец зерна N
N животного	Масса тела			Гибель животных	Клинические симптомы: вялость, поносы, выделения из носа, взъерошенность и т.д.	Масса органов
	начальная (г)	конечная (г)	прирост в %			печень		селезенка		тимус
						Масса печени в г	Относительная масса печени в г на 100 г тела	Масса селезенки в г	Относительная масса селезенки в г на 100 г тела	Масса тимуса в г	Относительная масса тимуса в г на 100 г тела
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
Среднее М				Всего погибших % погибших	Всего с клинич. симпт. %	Средние показатели по группе

Форма N 2. Регистрация результатов испытаний зерна на токсичность на крысятах.
Макроскопические изменения в органах

Дата опыта:

Образец N

N животного

Визуально выявляемые изменения в органах

Результаты микроскопического изучения органов

Легкие (пневмония)

Печень (желтизна, зернистость и др.)

Кишечник (вздутие, гиперемия сосудов и др.)

Пейеровы бляшки

Мезентеральный брыжеечный лимфоузел

Тимус

Печень

Селезенка

Почки

Кишечник

Брыжеечные лимфоузлы

Пейеровы бляшки

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7

Среднее по группе

Кол-во животн. (в %) с изменен. в органах

Форма N 3. Сравнение характеристик опытных и контрольных животных, полученных при испытании токсичности зерна на крысятах

Дата опыта:
N образца зерна	Характеристика образца (откуда получен, % розово окрашенных зерен)	Кол-во погибших животных (в %)	Средний прирост массы тела выживших животных (в %)	Кол-во животных (в %) с клиническими симптомами	Средняя относительная масса органов животных по группе
					Печень (г/100 г массы тела)	Селезенка (г/100 г массы тела)	Тимус (г/100 г массы тела)
1. 2. 3. и т.д.
Контроль - доброкачественное зерно
Контроль - интактные крысята

Форма N 4. Сравнение макроскопических и микроскопических изменений в органах опытных и контрольных животных, полученных при испытании токсичности зерна на крысятах

Дата опыта:

N образца зерна

Х-ка образца (откуда получен, % розово окраш. зерен)

Количество животных (в %) с визуально выявленными изменяемыми в органах

Количество животных (в %) с микроскопическими изменениями в органах

Пневмония

Печень

Кишечник

Пейеровы бляшки

Брыжеечный лимфоузел

Тимус

Печень

Селезенка

Почки

Кишечник

Пейеровы бляшки

Брыжеечные лимфоузлы

1. 2. 3. и т.д.

Контроль - доброкачеств. зерно

Контроль - интактные крысята

6. Оценивают токсичность зерна по данным форм 3 и 4. При токсичности зерна наблюдаются изменения одновременно по ряду признаков.

Зерно оценивается по 4-балльной системе:

1) резкотоксичное - при гибели одного или более экспериментальных животных - (++++ или 4+);

2) токсичное - при наличии клинических признаков токсичности и отклонений в макроскопических характеристиках одного органа у 100% опытных животных или при поражении двух, трех и более органов более чем у 50% опытных животных, что может сопровождаться потерей веса животными или резким снижением прироста массы тела по сравнению с контролем (например, шерстный покров взъерошен, все животные малоподвижны, прирост тела снижен: в опыте - 17%, в контроле - 30%, печень с желтизной и зернистостью - у 5 крысят; пневмония - у 4; лимфоузлы больше нормы - у 4; кишечник вздут - у 5 крысят) - (+++ или 3+);

3) слаботоксичное - клинических проявлений нет, прирост массы близок к контролю, но при вскрытии обнаруживаются визуально у 2-3 из 7 животных 1 или 2 признака патологических отклонений (пневмония и желтизна печени; или вздутый кишечник и увеличенные лимфоузлы с гиперемированными сосудами и увеличенные пейеровы бляшки и т.д.) - (++ или +).

При сопоставлении контрольных и опытных животных при взятии в опыт полноценных животных изменения в печени, кишечнике, лимфоузлах, а также свежая пневмония в контрольной группе животных не должны обнаруживаться более чем у одного животного. Если пневмония обнаружена у половины контрольных животных, то этот признак не может рассматриваться как свидетельство токсического действия исследуемого зерна при оценке показателей у опытных животных.

10. Рекомендации по использованию розово окрашенного зерна после проверки его токсичности

1. При наличии стерильных зон угнетения роста дрожжей и/или Bacillus megaterium и гибели опытных крысят (+4) зерно оценивается как резкотоксичное и может быть использовано только на технические цели.

2. При отсутствии стерильных зон угнетения роста дрожжей и Bacillus megaterium, но при гибели опытных крысят зерно также оценивается как резкотоксичное и может быть использовано только на технические цели.

3. При наличии стерильных зон угнетения роста дрожжей и/или Bacillus megaterium и токсическом действии на опытных крысят (+3) без гибели животных зерно оценивается как токсичное. Для окончательного решения необходимо определить содержание соответствующих микотоксинов*** (Т-2 токсина, вомитоксина, афлатоксина, охратоксина) и по результатам принимается решение о подсортировке зерна с содержанием розово окрашенных зерен от 3 до 10% доброкачественным зерном до содержания розово окрашенных зерен не выше 3%. Токсичность подсортированного зерна повторно проверяется на животных. Токсичное зерно с содержанием розово окрашенных зерен свыше 10% может быть использовано на фуражные и технические цели в соответствии с заключением ветеринарного надзора.

4. Если у зерна установлены слабые токсические свойства на животных (+2), но гибели экспериментальных животных не наблюдалось и не было выявлено зон угнетения роста дрожжей и Bacillus megaterium, зерно считается слаботоксичным. После анализа на вомитоксин зерно с содержанием розово окрашенных зерен от 3 до 10% может быть использовано на продовольственные цели только с подсортировкой доброкачественным зерном нормальной окраски до содержания розово окрашенных зерен не выше 3%. Зерно, содержащее свыше 10% розово окрашенных зерен, может быть использовано на фуражные и технические цели в соответствии с заключением ветеринарного надзора.

5. Наличие зон угнетения роста дрожжей и/или Bacillus megaterium при отсутствии токсического действия на опытных крысят является показанием для проведения химического анализа зерна, как условно-токсичного, на содержание соответствующих микотоксинов (Т-2 токсина, вомитоксина, афлатоксина и охратоксина). Если микотоксины не обнаруживаются, зерно считается нетоксичным и реализуется как нетоксичное (см. п. 6).

6. Если зерно, содержащее свыше 3% зерен с розово окрашенными оболочками, в опытах по применяемой схеме не обнаруживает токсические свойства, то после определения содержания вомитоксина, зерно с содержанием розово окрашенных зерен от 3 до 5% может быть использовано на продовольственные цели без ограничений, а при содержании розово окрашенных зерен от 5 до 10% - с подсортировкой доброкачественным зерном до содержания розово окрашенных зерен не выше 5%. Зерно, содержащее свыше 10% розово окрашенных зерен, может быть использовано на фуражные и технические цели в соответствии с заключением ветеринарного надзора.

По вопросам практического внедрения биологических методов определения токсичности зерна следует обращаться в Институт питания Академии медицинских наук СССР (Москва, 109240, Устьинский проезд, дом 2/14, телефоны: 227-88-64, 297-74-43).

Культуры микроорганизмов Bacillus megaterium ВКМВ-44 и Saccharomyces lactis ВКМУ-459 можно выписать из Всесоюзной коллекции микроорганизмов по адресу: 142292, г. Пущино, Московской области, Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, телефон: 231-30-87, а также получить в Институте питания АМН СССР.

Для получения стандарта мутности для оптической стандартизации бактериальных взвесей обращаться в Институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича.

Заместитель главного государственного санитарного врача СССР

А.И. Заиченко

______________________________

* С выходом в свет Санитарных правил "Определение токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек" отменяется действие "Методических указаний по определению токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек" N 3239-85 и "Методических указаний по определению токсичности зерновых культур и продуктов их переработки, пораженных грибами рода Фузариум секции Sporotrichiella" N 1829-78.

** Картофельный агар обеспечивает лучший рост культуры, чем МПА с 1% глюкозы.

*** Вышеперечисленные микотоксины определяются химическими методами в соответствии с нижеперечисленными методическими указаниями и рекомендациями:

1. Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье. N 3184-84, М., 1984 г.

2. Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) в зерне и зернопродуктах. N 3940-85, М., 1985 г.

ГАРАНТ:

Взамен "Методических указаний по обнаружению, идентификации и определению содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) в зерне и зернопродуктах" N 3940-85 введены в действие Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) и зеараленона в зерне и зернопродуктах, утвержденные Минздравом СССР 27 июня 1990 г. N 5177-90

3. Методические рекомендации по обнаружению, идентификации и определению содержания афлатоксинов в пищевых продуктах. N 2273-80, М., 1981 г.

4. Методические рекомендации по обнаружению, идентификации и определению содержания охратоксина А в пищевых продуктах. N 3245-85, М., 1985 г.