Методические указания МУК 4.1.2990-12 "Измерение остаточного содержания пириметанила в воде, почве, картофеле, винограде, землянике, томатах, семечковых плодовых культурах, виноградном, томатном и яблочном соках методом капиллярной газожидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 19 марта 2012 г.)

Методические указания МУК 4.1.2990-12
"Измерение остаточного содержания пириметанила в воде, почве, картофеле, винограде, землянике, томатах, семечковых плодовых культурах, виноградном, томатном и яблочном соках методом капиллярной газожидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 19 марта 2012 г.)

Дата введения: с момента утверждения
Введены впервые

Свидетельство о метрологической аттестации от 29.09.2011 N 01.00225/205-69-11.

1. Назначение и область применения

Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой концентрации пириметанила в воде в диапазоне (0,001-0,01) , массовой доли в почве в диапазоне (0,01-0,1) (мг/кг), в картофеле в диапазоне (0,05-0,5) (мг/кг), в томатах и томатном соке в диапазоне (0,5-5,0) (мг/кг), в винограде, землянике, яблоках, виноградном и яблочном соках в диапазоне (2,5-10,0) (мг/кг) методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

Название вещества по номенклатуре ИСО: Пириметанил.

Название вещества по номенклатуре ИЮПАК: N-(4,6-диметилпиримидин-2-ил)анилин.

Мол. масса: 199,3

Кристаллическое вещество от белого до светло-бежевого цвета. Температура плавления: 96,3°С. Давление паров при 25°С: 2,2 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода при 25°С: = 2,84 (pH 6,1). Растворимость () при 20°С: ацетон - 389, дихлорметан -1 000, метанол - 176, этилацетат - 617, толуол - 412, н-гексан - 23,7; растворимость в воде (pH 6,1) при 25°С - 0,121 .

Вещество стабильно при нормальных условиях хранения и не гидролизуется в водном растворе при различных значениях температуры и pH.

В биологически активных почвах в аэробных условиях пириметанил разрушается достаточно быстро ( колеблется от 7 до 54 дней).

Краткая токсикологическая характеристика

Пириметанил относится к веществам малоопасным по острой пероральной и дермальной токсичности ( для крыс более 5 000 ), но умеренно опасным - по ингаляционной токсичности ( для крыс более 1 980 ). Не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую глаз кролика, не обладает мутагенным и тератогенным эффектом.

Область применения

Пириметанил - контактный фунгицид с местным системным эффектом, обладающий защитным и лечебным действием. Эффективен в борьбе с возбудителями серой гнили и парши на виноградниках, посадках семечковых и косточковых плодовых, овощных и декоративных культурах. Механизм его действия связан с ингибированием синтеза метионина, приводящего к подавлению секреции ферментов, необходимых для процесса заражения.

Проходит регистрационные испытания в Российской Федерации в качестве фунгицида в составе смесевого препарата на посадках картофеля, винограда, земляники, томатов открытого и защищенного грунта, в яблоневых и грушевых садах с нормой расхода от 150 до 450 г д.в./га.

Гигиенические нормативы для пириметанила в картофеле, винограде, землянике, томатах и яблоках в России не установлены. В странах ЕС для пириметанила установлены следующие гигиенические нормативы: MRL в томатах - 1 (мг/кг), в землянике, яблоках, винограде - 5 (мг/кг). Чувствительность разработанного в странах ЕС метода анализа пириметанила для картофеля 0,05 (мг/кг).

2. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.

Таблица 1

Анализируемый объект	Диапазон измерений содержания пириметанила, (мг/кг)	Показатель точности (границы относительной погрешности) _ , % при Р = 0,95	Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), , %	Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), , %	Предел повторяемости, r, %, Р = 0,95, n = 2	Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, , % (= =2)
1	2	3	4	5	6	7
Вода	От 0,0010 до 0,005 вкл. ()	50	12	18	33	44
	Св. 0,005 до 0,010 вкл. ()	40	10	15	28	37
Почва	От 0,010 до 0,05 вкл.	60	15	22	42	53
	Св. 0,05 до 0,10 вкл.	45	9	18	25	47
Картофель	От 0,05 до 0,10 вкл.	50	12	18	33	44
	Св. 0,10 до 0,5 вкл.	40	9	14	25	35
Томаты	От 0,5 до 1,0 вкл.	55	14	21	39	51
	Св. 1,0 до 5 вкл.	40	9	14	25	35
Томатный сок	От 0,5 до 1,0 вкл.	40	10	15	28	37
	Св. 1,0 до 5 вкл.	30	6	9	17	22
Виноград	От 2,5 до 5 вкл.	20	3	5	8	12,5
	Св. 5,0 до 10 вкл.	10	1,6	3	4,4	8
Виноградный сок	От 2,5 до 5 вкл.	18	5	7,5	14	18
	Св. 5,0 до 10,0 вкл.	9	1,6	3	4,4	8
Земляника	От 2,5 до 5 вкл.	14	3	5	8	12,5
	Св. 5,0 до 10,0 вкл.	7	1,5	2,5	4	6
Яблоки	От 2,5 до 5 вкл.	21	6,5	10	18	25
	Св. 5,0 до 10 вкл.	12	4	6	11	15
Яблочный сок	От 2,5 до 5 вкл.	12	2,5	4	7	10
	Св. 5,0 до 10 вкл.	6	1,5	2,5	4	6

3. Метод измерений

Метод основан на экстракции пириметанила из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстрактов, содержащих пириметанил, от коэкстрактивных компонентов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем, с последующим измерением содержания пириметанила методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) при программировании температуры с использованием термоионного детектора (ТИД) и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.

4. Требования к средствам измерений, вспомогательным устройствам, реактивам и материалам*

4.1. Средства измерений

Газовый хроматограф "Varian СР-3800" с ТИД (США)
Весы аналитические "Sartorius 6110" с наибольшим пределом взвешивания 110 г	ГОСТ Р 53228-2008
Весы лабораторные "Metler Р-160" с наибольшим пределом взвешивания 160 г	ГОСТ Р 53228-2008
Набор гирь	ГОСТ 7328-2001
Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2, 2-1000-2	ГОСТ 1770-74
Пипетки градуированные 1-1-2-1; 1-1-2-2; 1-2-2-5; 1-2-2-10	ГОСТ 29227-91
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0,2	ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные 1-25;1-50; 1-100; 1-500; 1-1 000	ГОСТ 1770-74
Микрошприц МШ-1Ф	ТУ 64-1-2850

4.2. Реактивы

Пириметанил (CAS 53112-28-0) с содержанием основного вещества не менее 99,5 % ("Байер", Германия)
Ацетон, квалификации чда	ГОСТ 2603-79
Вода дистиллированная или деионизованная	ГОСТ 6709-79
Гелий газообразный, очищенный марки "А"	ТУ 0271-135-31323949-2005
н-Гексан, квалификации хч	ТУ 6-09-3375-78
Калий углекислый, квалификации хч	ГОСТ 4221-76
Калия перманганат, квалификации хч	ГОСТ 20490-75
Кальция хлорид, квалификации хч	ГОСТ 4161-77
Кислота серная, квалификации хч	ГОСТ 4204-77
Натрий углекислый, квалификации хч	ГОСТ 83-79
Натрий серно-кислый, безводный, квалификации хч	ГОСТ 4166-76
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), квалификации ч	ГОСТ 22300-76

4.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6с	ТУ 64-1-2851-78
Ванна ультразвуковая, модель D-50 ("Branson Instr. Co., США)
Гомогенизатор "Omni-mixer" ("Sorvall", США) или гомогенизатор МРТУ 42-1505 Генератор водорода, мод. SPE ("General Electric", США)
Компрессор (СКБ "Хроматэк", Россия) Дистиллятор "Cyclon III", модель 4 BD ("Fistreem", Великобритания)
Установка "Elgastat В 114" с патроном "Elgacan В 114" для получения деионизированной воды ("Elga", Великобритания)
Воронка Бюхнера	ГОСТ 9147-80
Воронки делительные вместимостью 100	ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные стеклянные	ГОСТ 25336-82
Колба Бунзена	ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10 и 100	ГОСТ 9737-93
Колбы плоскодонные вместимостью 250	ГОСТ 9737-93
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая VF-5ms (типа SE-52), длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, "Varian" (США)
Колонка хроматографическая стеклянная, длиной 20 см, внутренним диаметром 8-10 мм Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М	ТУ 25-11-917-76
или ротационный вакуумный испаритель В-169, "Buchi" (Швейцария)
Силикагель 60 (0,063-0,2 мм) для колоночной хроматографии ("Мерк", Германия)
Стаканы химические вместимостью 100 и 500	ГОСТ 25336-82
Стекловата
Установка для перегонки растворителей с	ГОСТ 9737-93
дефлегматором	(ИСО 641-75)
Фильтры бумажные "красная лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77

* Примечание. Допускается применение средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов иных производителей с аналогичными техническими и метрологическими характеристиками, приведенными в разделе 4.

5. Требования безопасности, охраны окружающей среды

5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.

5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91, в наличии должны быть средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90. Обучение работающих правилам безопасности труда проводят согласно ГОСТ 12.0.004-90.

5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.

6. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения газохроматографического анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля.

7. Требования к условиям измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

7.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу

- температура воздуха	°С;
- атмосферное давление	(84-106) кПа;
- относительная влажность воздуха, не более	80%.

7.2. Условия хроматографического анализа

Температура термостата испарителя	260°С;
Температура термостата детектора	280°С.
Режим программирования температуры колонки:
- начальная температура	170°С;
- изотермический режим при 170°С	2 мин;
- скорость подъема температуры:
в диапазоне от 170 до 220°С	20°С/мин;
в диапазоне от 220 до 240°С	5°С/мин;
- изотермический режим при 240°С	3 мин;
- скорость подъема температуры в диапазоне от 240 до 280°С	20°С/мин;
- изотермический режим при 280°С	5 мин.
Расход газов:
газа-носителя (гелий)	2,0 ;
водорода	4,3 ;
воздуха	175 .
Объем вводимой пробы:	1 .
Время удерживания пириметанила:	мин.
Линейный диапазон детектирования:	0,2-2,0 нг.

8. Подготовка к выполнению измерений

Перед проведением измерений проводят следующие операции: очистку органических растворителей, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовку колонки с силикагелем, градуировку хроматографа.

8.1. Очистка органических растворителей

8.1.1. Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

Срок хранения - 1 неделя.

8.1.2. Очистка этипацетата

Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%.

Навеску г натрия углекислого в конической колбе растворяют в (40-60) дистиллированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.

Срок хранения раствора - 1 неделя.

Этилацетат промывают последовательно раствором натрия углекислого с массовой долей 5%, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют. Срок хранения - 1 неделя.

8.1.3. Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 ацетона 10 г и 2 г ). Срок хранения - 1 неделя.

8.2. Кондиционирование хроматографической колонки

Капиллярную кварцевую колонку VF-5ms (типа SE-52) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 290°С и скорости газа-носителя 2 в течение 8-10 ч.

8.3. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 20 см и внутренним диаметром 8-10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 3 г силикагеля в 10 гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают последовательно 15 ацетона и 10 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 9 : 1 со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

8.4. Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания пириметанила из колонки с силикагелем

При отработке методики или поступлении новой партии силикагеля проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания пириметанила из колонки с силикагелем.

В круглодонную колбу вместимостью 10 помещают 0,5 градуировочного раствора пириметанила в смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8 : 2, с массовой концентрацией 10 (п. 8.5.2) и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40°С. Сухой остаток растворяют в 2 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 9:1, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 8.3. Промывают колонку 40 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 9:1, со скоростью 1-2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 50 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8:2, отбирая последовательно по 5 элюата. Каждую фракцию упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40°С, сухие остатки растворяют в 2 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8:2, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и затем хроматографируют в соответствии с п. 7.2.

По результатам обнаружения пириметанила в каждой из фракций определяют объем смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8:2, необходимый для полного вымывания флуопирама из колонки.

8.5. Приготовление градуировочных растворов

8.5.1. Приготовление исходного градуировочного раствора пириметанила с массовой концентрацией 100

В мерную колбу вместимостью 100 помещают (0,0100 _ 0,0001) г пириметанила, растворяют в (30-40) этилацетата, доводят объем раствора до метки этилацетатом, тщательно перемешивают.

Раствор хранят при температуре не выше минус 18°С не более 2 месяцев.

8.5.2. Приготовление градуировочного раствора пириметанила с массовой концентрацией 10 (раствор N 1)

В мерную колбу вместимостью 100 помещают 10 исходного градуировочного раствора пириметанила с массовой концентрацией 100 (п. 8.5.1), разбавляют смесью гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8:2 до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов N 2-5.

При оценке полноты извлечения пириметанила для внесения в образцы используют ацетоновые растворы вещества.

Градуировочный раствор N 1 и ацетоновые растворы пириметанила хранят при температуре не выше минус 18 °С в течение месяца.

8.5.3. Приготовление градуировочных растворов пириметанила с массовой концентрацией 0,2-2,0 (растворы N 2-5)

В 4 мерные колбы вместимостью 50 помещают 1, 2, 5 и 10 градуировочного раствора N 1 пириметанила с массовой концентрацией 10 (п. 8.5.2), доводят до метки смесью гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8:2, тщательно перемешивают, получают градуировочные растворы N 2-5 с массовой концентрацией пириметанила 0,2, 0,4, 1,0 и 2,0 соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

8.6. Градуировка хроматографа

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ) от массовой концентрации пириметанила в растворе (), устанавливают методом абсолютной градуировки по 4 градуировочным растворам.

В инжектор хроматографа вводят по 1 каждого градуировочного раствора (п. 8.5.3) и анализируют при условиях п. 7.2. Каждый раствор хроматографируют дважды. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предел повторяемости r.

По полученным данным строят градуировочную характеристику.

8.7. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

, где (1)

, - значение площади пика пириметанила в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно, усл. ед.;

- норматив контроля, , где

_ - границы относительной погрешности, %, (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

9. Отбор, хранение и подготовка проб

Отбор проб производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 17.4.3.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 28168-89 "Почвы. Отбор проб", ГОСТ 25896-83 "Виноград свежий столовый. ТУ", ГОСТ 25892-83 "Сок виноградный. ТУ", ГОСТ 27572-87 "Яблоки свежие для промышленной переработки", ГОСТ 1725-85 "Томаты свежие. Требования при заготовке, поставке и реализации", ГОСТ 51808-2001 "Картофель свежий продовольственный, реализуемый в розничной торговой сети. ТУ", ГОСТ 7176-85 "Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. ТУ", ГОСТ 26832-86 "Картофель свежий для переработки на продукты питания. ТУ", ГОСТ 6014-68 "Картофель свежий для переработки". ТУ", ГОСТ 6828-89 "Земляника свежая. Требования при заготовках, поставках и реализации".

Пробы воды анализируют в день отбора пробы или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре при температуре не ниже минус 18°С не более 2 недель.

Пробы почвы подсушивают на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре (4-6)°С не более 4 недель. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не ниже минус 18 °С.

Пробы клубней, ягод и плодов хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 4°С не более суток; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18°С не более 6 месяцев. Пробы сока хранят при температуре (0-4)°С в герметичной упаковке не более недели, при температуре не выше минус 18°С в течение 2 месяцев. Перед проведением анализа плоды, клубни и ягоды измельчают.

9.1. Экстракция пириметанила

9.1.1. Экстракция пирметанила из проб воды

В делительную воронку вместимостью 500 помещают 200 отфильтрованной воды, добавляют 30 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8:2 и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз верхний органический слой отделяют и фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу. Водную фазу экстрагируют указанной выше смесью еще дважды порциями по 20 . Объединенную органическую фракцию упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре не выше 40°С. Сухой остаток растворяют в 1 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8:2, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и анализируют на содержание пириметанила по п. 10.

9.1.2. Экстракция пириметанила из проб почвы

Пробу воздушно-сухой почвы массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 , добавляют 100 смеси ацетон-вода с объемным соотношением компонентов 8 : 2, перемешивают. Колбу помещают в ультразвуковую ванну на 10 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 . Почву повторно экстрагируют 50 смеси ацетон-вода с объемным соотношением компонентов 8:2 в течение 30 мин при встряхивании и фильтруют. Объединенный экстракт упаривают на роторном вакуумном испарителе при температуре не выше 40°С до полного удаления ацетона. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.1.3. Экстракция пириметанила из клубней, плодов, ягод

Навеску измельченного растительного материала массой 20 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 , добавляют 100 ацетона и гомогенизируют 3 мин при 10 000 об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см3. Осадок на фильтре промывают 50 ацетона. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора. Отбирают 1/4 объема экстракта клубней картофеля (эквивалентного 5 г образца) или 1/20 объема экстрактов ягод винограда и земляники, плодов томата и яблок (эквивалентного 1 г образца), переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 и добавляют 30 дистиллированной воды. Растворы упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40°С до водной фазы (не менее 20 ), которую переносят в делительную воронку вместимостью 100 . Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.1.4. Экстракция из проб сока

Навеску (5 г) свежевыжатого сока помещают в химический стакан вместимостью 100 , приливают 100 дистиллированной воды, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/5 его часть (эквивалентную 1 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 100 . Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К экстрактам, полученным по пп. 9.1.2, 9.1.3 и 9.1.4 и помещенным в делительные воронки, приливают по 20 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8:2, содержимое интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 . Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 20 и 10 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8:2. Объединенную органическую фракцию упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40°С. Сухой остаток экстракта почвы растворяют в 1 , томатного сока в 2,5 , а виноградного и яблочного в 12,5 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8:2, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, анализируют на содержание пириметанила по п. 10. Сухие остатки экстрактов клубней картофеля, ягод и плодов подвергают дополнительной очистке на колонке с силикагелем по п. 9.3. (При необходимости такой же очистке подвергаются и пробы почвы, содержащие мешающие определению коэкстрактивные вещества.)

9.3 Очистка экстракта на колонке с силикагелем

Сухие остатки экстрактов клубней картофеля, ягод и плодов, полученные по п. 9.2, растворяют в 3 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 9:1, помещая в ультразвуковую ванну на 2 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 8.3. Колбу обмывают 2 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 9:1, которые также наносят на колонку. Колонку промывают 30 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 9:1 со скоростью 1-2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Пириметанил элюируют с колонки 35 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8:2, собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 . Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток экстракта клубней картофеля растворяют в 1,25 , плодов томата в 2,5 , ягод винограда, земляники, яблок в 12,5 смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8 : 2, помещая в ультразвуковую ванну на 2 мин, и анализируют на содержание пириметанила по п. 10.

Полнота извлечения пириметанила при проведении всех операций подготовки пробы не менее 94 % для проб воды и не менее 88% для проб почвы, клубней картофеля, плодов, ягод и сока.

10. Выполнение измерений

10.1. В инжектор хроматографа вводят 1 очищенного экстракта анализируемой пробы (пп. 9.1-9.3), анализируют при условиях п. 7.2 и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.

10.2. Для каждой пробы воды, почвы, клубней картофеля, ягод, плодов и сока повторяют операции по пп. 9.1-9.3, 10.1.

11. Обработка результатов измерений

11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используют программу сбора и обработки хроматографической информации "Galaxie", версия 1.9.3.2.

Альтернативная обработка результатов.

По градуировочной характеристике находят значение массовой концентрации пириметанила в экстрактах, С, .

Массовую концентрацию пириметанила X, , в пробах воды рассчитывают по формуле:

(2)

Массовую долю пириметанила X, , в пробах почвы, клубней картофеля, ягод, плодов и сока рассчитывают по формуле:

, где (3)

С - значение массовой концентрации пириметанила в экстракте, ;

V- объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

V" - объем анализируемой части пробы воды, взятой на экстракцию, ;

m - масса анализируемой части пробы, соответствующая доле экстракта, использованной для очистки на колонке с силикагелем и последующего хроматографического определения, г;

0,94 и 0,88 - коэффициенты извлечения пириметанила, учитывающие все процедуры подготовки пробы.

11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

, где (4)

, - результаты параллельных определений массовой концентрации (доли) пириметанила, ();

r - значение предела повторяемости, % (табл 1).

Если условие (4) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.

11.3. Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

при Р = 0,95, где

- среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми по п. 11.2, ();

_ - границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

В случае если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, результат анализа представляют в виде:

"массовая концентрация пириметанила в воде менее 0,001 (более 0,01 )";

"массовая доля пириметанила в почве менее 0,01 (более 0,1 )";

"массовая доля пириметанила в картофеле менее 0,05 (более 0,5 )";

"массовая доля пириметанила в томатах и томатном соке менее 0,5 (более 5 )";

"массовая доля пириметанила в винограде, землянике, яблоках, виноградном и яблочном соках менее 2,5 (более 10 )".

Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал пириметанила, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 2,0 , разбавляют, но не более чем в 10 раз, и анализируют в соответствии с данной методикой.

12. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

12.1. Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

12.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

12.3. Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью по формуле (5)

, где (5)

, - средние значения массовой концентрации (доли), полученные в первой и второй лабораториях, ();

- значение критической разности, % (табл. 1).

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (п. 5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (п. 5.3.4).

13. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 ("Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений"), используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Вместо "п. 2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002" имеется в виду "п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002"

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

14. Разработчики

Дубовая Л.В., науч. сотр.; Макеев А.М., зав. лаб., канд. биол. наук (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии Россельхозакадемии).

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко