Методические указания МУК 4.1.3333-16 "Измерение массовой концентрации метил-(+)-(S)-альфа-(о-хлорфенил)-6,7-дигидротиено[3,2-с]пиридин-5(4Н)-ац етата гидросульфата (клопидогрела гидросульфат) в воздухе рабочей зоны методом спектрофотометрии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 17 февраля 2016 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.3333-16
"Измерение массовой концентрации етил-(+)-(S)-альфа-(о-хлорфенил)-6,7-дигидротиено[3,2-с]пиридин-5(4Н)-ацетата гидросульфата (клопидогрела гидросульфат) в воздухе рабочей зоны методом спектрофотометрии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 17 февраля 2016 г.)

Свидетельство о государственной метрологической аттестации N 01.00225/205-17-15.

1. Назначение и область применения

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода спектрофотометрии для измерений массовой концентрации клопидогрела гидросульфата в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 0,1-0,6 .

Методические указания носят рекомендательный характер.

2. Характеристика вещества

2.1. Физико-химические свойства

Клопидогрела гидросульфат

Эмпирическая формула:

Молекулярная масса: 419,9.

Регистрационный номер СAS: 120202-66-6.

Клопидогрела гидросульфат - кристаллический порошок белого цвета, без запаха, с температурой плавления 210°С. Мало растворим в воде, очень мало растворим в хлороформе, легко растворим в спирте метиловом, спирте этиловом 96%-м, практически нерастворим в ацетоне и эфире.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.2. Токсикологическая характеристика

Клопидогрела гидросульфат относится к группе средств, влияющих на свертывание крови и агрегацию тромбоцитов, подгруппе антиагрегантов (дезагреганты). Клопидогрела гидросульфат обладает раздражающим действием при контакте со слизистыми оболочками глаза, оказывает общетоксическое действие.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) клопидогрела гидросульфата в воздухе рабочей зоны 0,2 .

3. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой при выполнении измерений массовой концентрации клопидогрела гидросульфата метрологические характеристики не превышают значений, представленных в таблице 1 (при доверительной вероятности Р = 0,95).

Таблица 1

Метрологические характеристики

Диапазон измерений массовой концентрации клопидогрела гидросульфата,	Показатель точности (границы относительной погрешности), , % при Р = 0,95	Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), , %	Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), , %	Предел повторяемости, r, %, Р = 0,95, n = 2	Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, , %
От 0,10 до 0,30 вкл.	25	5	8	14	20
Св. 0,30 до 0,60 вкл.	14	3	5	8	12,5

4. Метод измерений

Измерение массовой концентрации клопидогрела гидросульфата выполняют методом спектрофотометрии.

Метод определения основан на способности растворов клопидогрела гидросульфата в спирте этиловом 96%-м поглощать УФ-излучение.

Измерение производят при длине волны 220 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на аналитические аэрозольные фильтры.

Нижний предел измерения содержания клопидогрела гидросульфата в анализируемом объеме пробы - 50 мкг.

Нижний предел измерений массовой концентрации клопидогрела гидросульфата в воздухе - 0,1 (при отборе 500 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства лекарственных форм, содержащих клопидогрела гидросульфат. Определению не мешают вспомогательные вещества: лактоза, целлюлоза микрокристаллическая, крахмал, гипромеллоза, титана диоксид, тальк.

5. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

5.1. Средства измерений

Спектрофотометр. Диапазон измерений (54 000-11 000) ,
воспроизводимость волновых чисел
Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г, диапазон взвешивания по шкале 1-100 мг, цена деления шкалы 1 мг, погрешность взвешивания по шкале мг	ГОСТ OIML R 76-1-11
Набор гирь	ГОСТ OIML R 111-1
Аспирационное устройство чётырехканальное с диапазоном расхода 5-35 и пределом допустимой погрешности	ТУ 4215-000-11696625-03
Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2	ГОСТ 1770-74
Пипетки 1-1-2-1, 1-1-2-5, 1-1-2-10	ГОСТ 29227-91
Пробирки мерные с пришлифованными пробками	ГОСТ 1770-74
Секундомер	ГОСТ 5072-79

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими техническими и метрологическими характеристиками.

5.2. Реактивы

Клопидогрела гидросульфат с содержанием основного вещества не менее 98,0% в пересчете на сухое вещество	НД ЛСР-002158/07-250112
Спирт этиловый 96%-й ректификованный	ГОСТ Р 51723-01

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

5.3. Вспомогательные устройства и материалы

Аналитические аэрозольные фильтры гидрофобные на основе перхлорвинила с площадью рабочей поверхности 10 (фильтры)	ТУ 95-1892-89
Фильтродержатели	ТУ 95.72.05-77
Фильтры бумажные обеззоленные средней плотности (фильтры бумажные)	ТУ 6-09-1678-77
Бюксы стеклянные СВ 24/10	ГОСТ 25336-82
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82
Воронки химические	ГОСТ 25336-82
Кюветы кварцевые с толщиной оптического слоя 10 мм
Дистиллятор	ГОСТ Р 50444
Шкаф сушильный	ТУ 61-1-721-79

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88 с изменением 1.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90. Необходимо провести обучение работников правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004-90.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-09 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке их результатов допускается специалист, имеющий высшее образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедший обучение и владеющий техникой спектрофотометрического анализа, освоивший метод анализа в процессе тренировки и уложившийся в нормативы оперативного контроля при проведении процедур контроля погрешности анализа.

8. Требования к условиям измерений

8.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

- температура воздуха	;
- атмосферное давление	(84-106) кПа;
- относительная влажность воздуха	не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, контроль стабильности градуировочной характеристики, отбор проб воздуха.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной раствор клопидогрела гидросульфата с концентрацией 1 000 готовят растворением г клопидогрела гидросульфата в спирте этиловом 96%-м в мерной колбе вместимостью 100 .

Раствор устойчив в течение двух недель при хранении в холодильнике.

9.1.2. Рабочий раствор клопидогрела гидросульфата с концентрацией 200 готовят разбавлением 10 основного раствора клопидогрела гидросульфата спиртом этиловым 96%-м в мерной колбе вместимостью 50 .

Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.2. Подготовка спектрофотометра

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности раствора от массы клопидогрела гидросульфата, устанавливают по шести сериям измерений по шести концентрациям вещества в каждой серии согласно табл. 2.

Таблица 2

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении клопидогрела гидросульфата

Номер градуированного раствора	Объем основного раствора клопидогрела гидросульфата с массовой концентрацией 1 000 ,	Объем рабочего раствора клопидогрела гидросульфата с массовой концентрацией 200 ,	Концентрация градуировочного раствора клопидогрела гидросульфата,	Содержание клопидогрела гидросульфата в анализируемом объеме раствора, мкг
1	0,00	0,00	0,0	0,0
2	0,00	0,25	5,0	50,0
3	0,10	0,00	10,0	100,0
4	0,15	0,00	15,0	150,0
5	0,20	0,00	20,0	200,0
6	0,25	0,00	25,0	250,0
7	0,30	0,00	30,0	300,0

Градуировочные растворы устойчивы в течение суток.

На фильтры, помещенные в бюксы, пипеткой вместимостью 1 наносят основной раствор клопидогрела гидросульфата с массовой концентрацией 1 000 и рабочий раствор клопидогрела гидросульфата с массовой концентрацией 200 в соответствии с табл. 2. Фильтры подсушивают при комнатной температуре и с помощью пипетки вместимостью 5 приливают по 5 спирта этилового 96%-го и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры тщательно отжимают, растворы сливают в пробирки мерные вместимостью 10 . Фильтры повторно обрабатывают 5 спирта этилового 96%-го, оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Растворы объединяют в мерных пробирках вместимостью 10 и доводят объем до метки спиртом этиловым 96%-м.

Оптическую плотность полученных градуировочных растворов измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 220 нм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого вещества (табл. 2, раствор N 1).

Строят градуировочную характеристику: на ось ординат наносят средние значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им величины содержания клопидогрела гидросульфата в мкг.

9.4. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в квартал, а также при смене реактивов и изменении условий анализа (после ремонта и поверки прибора). Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности готовят три градуировочных раствора по п. 9.3 (в начале, в середине и в конце диапазона измерений) и анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

, где (1)

, - значение оптической плотности образца клопидогрела гидросульфата для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно;

- норматив контроля, , где

- границы относительной погрешности, % (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное измерение этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировочная характеристика нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для установления градуировочной характеристики, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.

9.5. Отбор проб воздуха

Отбор проб проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 с изменением 1 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и Р 2.2.2006-05 (приложение 9) "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", раздел 2 "Контроль соответствия максимальным ПДК".

Одновременно отбирают две параллельные пробы.

Воздух с объемным расходом 35 аспирируют через фильтр, помещенный в фильтродержатель, снабженный металлической сеткой. Для определения массовой концентрации клопидогрела гидросульфата на уровне 1/2 ОБУВ необходимо отобрать не менее 500 воздуха в течение 15 мин.

Отобранные пробы могут храниться в бюксах в течение трех дней.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в бюкс, приливают 5 спирта этилового 96%-го и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в другой бюкс. Фильтр повторно обрабатывают 5 спирта этилового 96%-го, оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем тщательно отжимают и удаляют. Оба раствора последовательно фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр в мерную пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью 10 . Объем раствора доводят до метки спиртом этиловым 96%-м и далее анализ проводят аналогично градуировочным растворам.

Оптическую плотность полученного анализируемого раствора измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 220 нм по отношению к раствору сравнения, используя чистый фильтр. Раствор сравнения необходимо предварительно профильтровать через бумажный фильтр.

Количественное определение содержания клопидогрела гидросульфата (в мкг) в анализируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

Примечание. Фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в спирте этиловом 96%-м вспомогательных веществ, входящих в состав таблеток, содержащих клопидогрела гидросульфат.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию клопидогрела гидросульфата в воздухе рабочей зоны С, , вычисляют по формуле:

, где (2)

а - содержание клопидогрела гидросульфата в анализируемом объеме раствора, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

- объем воздуха, отобранный для анализа , приведенный к стандартным условиям (прилож. 1).

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

, где (3)

, - результаты параллельных определений массовой концентрации клопидогрела гидросульфата в воздухе рабочей зоны, ;

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.

12. Оформление результатов измерения

Результат количественного химического анализа представляют в виде:

, при Р = 0,95, где

- среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, ;

- границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

Если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация клопидогрела гидросульфата менее 0,1 (более 0,6 )".

13. Контроль результатов измерений

13.1. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью по формуле:

, где (4)

, - средние значения массовой концентрации клопидогрела гидросульфата, полученные в первой и второй лабораториях, ;

- значение критической разности, % (табл. 1).

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 (п. 5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 (п. 5.3.4).

13.2. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-02, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 и показателя правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-02.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А.Ю. Попова