Методические указания МУК 4.1.3429-17 "Измерение массовой концентрации 5-метокси-2-[(S)-[(4-метокси-3,5-диметил-2-пиридинил)метил]сульфинил]-1Н- бензимидазола магния тригидрата (соль) (эзомепразол магния тригидрат) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 февраля 2017 г.)

Методические указания МУК 4.1.3429-17
"Измерение массовой концентрации 5-метокси-2-[(S)-[(4-метокси-3,5-диметил-2-пиридинил)метил]сульфинил]-1Н-бензимидазола магния тригидрата (соль) (эзомепразол магния тригидрат) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 февраля 2017 г.)

Свидетельство о государственной метрологической аттестации N 01.00225/205-6-16.

1. Назначение и область применения

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерений массовой концентрации эзомепразола магния тригидрата в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 0,005-0,05 .

Методические указания носят рекомендательный характер.

2. Характеристика вещества

2.1. Физико-химические свойства

Эзомепразол магния тригидрат

Молекулярная масса 767,17.

Регистрационный номер СAS: 217087-09-7.

Эзомепразол магния тригидрат - белый (или почти белый) кристаллический гигроскопичный порошок без запаха с температурой плавления 170°С с разложением. Хорошо растворим в спирте этиловом 96%-м и спирте метиловом, растворим в метилене хлористом, слабо растворим в воде, ацетоне и изопропаноле.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.2. Токсикологическая характеристика

Эзомепразол магния тригидрат - противоязвенное лекарственное средство, ингибитор протонового насоса, правовращающий изомер омепразола; снижает секрецию соляной кислоты в желудке; умеренно опасен при поступлении внутрь, обладает общетоксическим и специфическим антигистаминным действием.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) эзомепразола магния тригидрата в воздухе рабочей зоны 0,01 .

3. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой при выполнении измерений массовой концентрации эзомепразола магния тригидрата метрологические характеристики не превышают значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности Р = 0,95).

Таблица 1

Метрологические характеристики

Диапазон измерений массовой концентрации эзомепразола магния тригидрата,	Показатель точности (границы относительной погрешности), , % при Р = 0,95	Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), , %	Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), , %	Предел повторяемости, r, %, Р = 0,95, n = 2	Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, ,%
От 0,005 до 0,010 вкл.	25	3	5	8	13
Св. 0,010 до 0,050 вкл.	13	2	3	6	7

4. Метод измерений

Измерение массовой концентрации эзомепразола магния тригидрата выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым спектрофотометрическим (УФ) детектированием. Метод основан на разделении эзомепразола магния тригидрата и других компонентов анализируемой смеси на хроматографической колонке, заполненной сорбентом, с последующей регистрацией эзомепразола магния тригидрата с помощью ультрафиолетового детектора. Сигнал детектора прямо пропорционален концентрации эзомепразола магния тригидрата.

Измерение проводят при длине волны 302 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на аналитические аэрозольные фильтры.

Минимально определяемое количество эзомепразола магния тригидрата в хроматографируемом объеме раствора пробы - 0,05 мкг.

Нижний предел измерений массовой концентрации эзомепразола магния тригидрата в воздухе 0,005 (при отборе 1 000 воздуха).

Метод специфичен в условиях приготовления препаративных форм на основе эзомепразола магния тригидрата. Измерению не мешают вспомогательные вещества: гипромеллоза, целлюлоза микрокристаллическая, сахароза, декстроза, метакриловой кислоты и этилакрилата сополимер, кросповидон, гипролоза, тальк, магния стеарат.

5. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

5.1. Средства измерений

Хроматограф жидкостный с ультрафиолетовым (УФ) детектором
Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 200 г, предел допустимой погрешности взвешивания мг	ГОСТ OIML R 76-1-11
Аспирационное устройство трехканальное с диапазоном расхода 40,0-200 и пределом допустимой погрешности	ТУ 4215-000-11696625-03
Иономер лабораторный типа рН-121 с пределом рН от -1 до +19 ед.	ГОСТ 22261-76
Колбы мерные, 2-50-2, 2-100-2, 2-1000-2	ГОСТ 1770-74
Пипетки 1-1-2-1, 1-1-2-5, 1-1-2-10	ГОСТ 29227-91
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, П-2-10-14/23 ХС	ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные, 3-50, 3-100, 3-250, 1-500	ГОСТ 1770-74
Микрошприц М-100 вместимостью 100	ГОСТ 8043-74

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

5.2. Реактивы

Эзомепразол магния тригидрата с содержанием основного вещества не менее 95,0% в пересчете на сухое вещество, НД 42-11630-06
Спирт этиловый 96%-й	ГОСТ Р 51723-01
Ацетонитрил осч	ТУ 6-09-14-2167-84
Натрий дигидрофосфат моногидрат , чда	ГОСТ 200-76
Динатрий гидрофосфат дигидрат	ГОСТ 31725-12
Натрий фосфат додекагидрат	ГОСТ 201-76
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72
Вода осч	ТУ 6-09-2502-77

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

5.3. Вспомогательные устройства и материалы

Колонка аналитическая, размером 150х4,6 мм, заполненная сорбентом С18 с размером частиц 5,0 мкм
Предколонка размером 10х3,2 мм, заполненная сорбентом С8 с размером частиц 7,0 мкм
Аналитические аэрозольные фильтры гидрофобные на основе перхлорвинила с площадью рабочей поверхности 20 (фильтры)	ТУ 95-1892-89
Фильтродержатели	ТУ 95.72.05-77
Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм	ТУ 9471-002-10471723-03
Бюксы стеклянные, СВ 24/10	ГОСТ 25336-82
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82
Воронки химические	ГОСТ 25336-82
Дистиллятор	ГОСТ Р 50444-92
Шкаф сушильный	ТУ 61-1-721-79

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88 с изменением N 1.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004-90.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-09 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК и ОБУВ, установленные ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке их результатов допускается специалист, имеющий высшее образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедший обучение и владеющий техникой анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, освоивший метод анализа в процессе тренировки и уложившийся в нормативы оперативного контроля при проведении процедур контроля погрешности анализа.

8. Требования к условиям измерений

8.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

- температура воздуха	;
- атмосферное давление	(84-106) кПа;
- относительная влажность воздуха, не более	80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб воздуха.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной раствор эзомепразола магния тригидрата с массовой концентрацией 1 000 готовят растворением г эзомепразола магния тригидрата в смеси: спирт этиловый 96%-й, фосфатный буферный раствор с рН 11,0 и вода особо чистая в соотношении 1:4:20 (по объему) в мерной колбе вместимостью 50 .

Раствор устойчив трое суток при хранении в холодильнике.

9.1.2. Рабочий раствор эзомепразола магния тригидрата N 1 с массовой концентрацией 100 готовят разбавлением 10,0 основного раствора эзомепразола магния тригидрата смесью: спирт этиловый 96%-й, фосфатный буферный раствор с рН 11,0 и вода особо чистая в соотношении 1:4:20 (по объему) в мерной колбе вместимостью 100 .

Раствор устойчив трое суток при хранении в холодильнике.

9.1.3. Рабочий раствор эзомепразола магния тригидрата N 2 с массовой концентрацией 20 готовят разбавлением 10,0 рабочего раствора эзомепразола магния тригидрата N 1 смесью: спирт этиловый 96%-й, фосфатный буферный раствор с рН 11,0 и вода особо чистая в соотношении 1:4:20 (по объему) в мерной колбе вместимостью 50 .

Раствор устойчив трое суток при хранении в холодильнике.

9.1.4. Приготовление 1,0 М раствора натрия дигидрофосфата моногидрата . В мерной колбе вместимостью 1 000 растворяют 138,0 г натрия дигидрофосфата моногидрата в воде особо чистой, доводят водой особо чистой до метки и перемешивают.

Раствор устойчив в течение двух недель при хранении в холодильнике.

9.1.5. Приготовление 0,5 М раствора динатрия гидрофосфата дигидрата . В мерной колбе, вместимостью 1 000 растворяют 89,0 г динатрия гидрофосфата дигидрата в воде особо чистой, доводят водой особо чистой до метки и перемешивают.

Раствор устойчив в течение двух недель при хранении в холодильнике.

9.1.6. Приготовление фосфатного буферного раствора с рН 11, 0. В мерной колбе вместимостью 1 000 растворяют 5,2 г натрия фосфата додекагидрата и 9,8 г динатрия гидрофосфата дигидрата , доводят водой особо чистой до метки и перемешивают.

Раствор устойчив в течение двух недель при хранении в холодильнике.

9.1.7. Приготовление фосфатного буферного раствора с рН 7,3. В мерной колбе вместимостью 1 000 смешивают 10,5 1,0 М раствора натрия дигидрофосфата моногидрата и 60 0,5 М раствора динатрия гидрофосфата дигидрата, доводят водой особо чистой до метки и перемешивают. Контролируют рН полученного раствора равным потенциометрически.

Раствор устойчив в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.1.8. Приготовление смеси для растворения: спирт этиловый 96%-й, фосфатный буферный раствор с рН 11,0 и вода особо чистая в соотношении 1:4:20 (по объему). В мерную колбу вместимостью 1 000 наливают 40 спирта этилового 96%-го, 160 фосфатного буферного раствора с рН 11,0 доводят до метки водой особо чистой и перемешивают.

Раствор устойчив в течение двух недель при хранении в холодильнике.

9.1.9. Приготовление подвижной фазы: смесь ацетонитрила с фосфатным буферным раствором с рН 7,3 и воды особо чистой в соотношении 3,5:5,0:1,5 (по объему). В мерной колбе вместимостью 1 000 смешивают 350 ацетонитрила и 500 фосфатного буферного раствора с рН 7,3, доводят объем водой особо чистой до метки и перемешивают. Перед использованием подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют.

Хранят в хорошо укупоренной таре в защищенном от света месте в течение недели.

9.2. Подготовка хроматографа

Подготовку хроматографа проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пиков (приборные единицы) от содержания эзомепразола магния тригидрата в хроматографируемом объеме градуировочных растворов, устанавливают по методу абсолютной градуировки по шести сериям измерений по шести концентрациям вещества в каждой серии согласно табл. 2.

Таблица 2

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении эзомепразола магния тригидрата

Номер градуировочного раствора	Объем рабочего раствора N 1 с концентрацией эзомепразола магния тригидрата 100 ,	Объем рабочего раствора N 2 с концентрацией эзомепразола магния тригидрата 20 ,	Содержание эзомепразола магния тригидрата на фильтре, мкг	Массовая концентрация эзомепразола магния тригидрата в градуировочном растворе,	Содержание эзомепразола магния тригидрата в хроматографируемом объеме градуировочного раствора, мкг
1	0,0	0,00	0,0	0,0	0,00
2	0,0	0,25	5,0	0,5	0,05
3	0,1	0,00	10,0	1,0	0,10
4	0,2	0,00	20,0	2,0	0,20
5	0,3	0,00	30,0	3,0	0,30
6	0,4	0,00	40,0	4,0	0,40
7	0,5	0,00	50,0	5,0	0,50

Градуировочные растворы используют свежеприготовленные. Растворы устойчивы в течение суток при хранении в холодильнике.

На фильтры, помещенные в бюксы, пипеткой вместимостью 1 наносят рабочий раствор эзомепразола магния тригидрата N 1 с массовой концентрацией 100 и рабочий раствор эзомепразола магния тригидрата N 2 с массовой концентрацией 20 в соответствии с табл. 2. Фильтры подсушивают при комнатной температуре, затем, используя пипетку вместимостью 5,0 , приливают по 5,0 смеси: спирт этиловый 96%-й, фосфатный буферный раствор с рН 11,0 и вода особо чистая в соотношении 1:4:20 (по объему) и оставляют на 10 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры отжимают, растворы сливают в мерные пробирки вместимостью 10 . Фильтры повторно обрабатывают 5,0 смеси: спирт этиловый 96%-й, фосфатный буферный раствор с рН 11,0 и вода особо чистая в соотношении 1:4:20 (по объему) и оставляют на 10 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Растворы сливают в те же пробирки, объем доводят до 10,0 смесью: спирт этиловый 96%-й, фосфатный буферный раствор с рН 11,0 и вода особо чистая в соотношении 1:4:20 (по объему). Далее растворы фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографические виалы.

Инжектируют в хроматограф по 0,1 каждого из градуировочных растворов.

По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости площади пика (приборные единицы) от содержания эзомепразола магния тригидрата в хроматографируемом объеме градуировочных растворов (мкг).

9.4. Условия хроматографирования градуировочных растворов и растворов анализируемых проб

Длина волны детектора	302 нм
Объем вводимой пробы	0,1
Температура колонки	25°С
Расход подвижной фазы	1,0
Время удерживания эзомепразола магния тригидрата мин.

9.5. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества по п. 9.3 (в начале, середине и в конце измерений) и анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

, где (1)

, - значение площади пика (приборные единицы) эзомепразола магния тригидрата в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно;

- норматив контроля, , где

- границы относительной погрешности, % (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное измерение этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировочная характеристика нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировочной характеристики, предусмотренной методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики прибор градуируют заново.

9.6. Отбор проб воздуха

Отбор проб проводят с учетом требований ГОСТа 12.1.005-88 с изменением N 1 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и Р 2.2.2006-05 (прилож. 9) "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", раздел 2 "Контроль соответствия максимальным ПДК".

Одновременно отбирают две параллельные пробы.

Воздух аспирируют в течение 10 минут через фильтр, помещенный в фильтродержатель, снабженный металлической сеткой. Для определения массовой концентрации эзомепразола магния тригидрата на уровне 0,005 (1/2 ОБУВ) отбирают не менее 1 000 воздуха. Отобранные пробы можно хранить в бюксах в течение суток в холодильнике.

10. Выполнение измерений

Фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс и с помощью пипетки вместимостью 5 приливают 5,0 смеси: спирт этиловый 96%-й, фосфатный буферный раствор с рН 11,0 и вода особо чистая в, соотношении 1:4:20 (по объему), помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 10 минут для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в мерную пробирку вместимостью 10 . Фильтр повторно обрабатывают 5,0 смеси: спирт этиловый 96%-й, фосфатный буферный раствор с рН 11,0 и вода особо чистая в соотношении 1:4:20 (по объему), помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 10 минут, снова тщательно отжимают и удаляют. Раствор сливают в ту же пробирку, объем раствора доводят до метки смесью: спирт этиловый 96%-й, фосфатный буферный раствор с рН 11,0 и вода особо чистая в соотношении 1:4:20 (по объему). Далее раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографическую виалу.

Инжектируют в хроматограф по 0,1 раствора анализируемой пробы.

Хроматографический анализ растворов анализируемой пробы выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.

Регистрируют не менее двух хроматограмм для каждого раствора анализируемой пробы, соблюдая все условия, требуемые для градуировки хроматографической системы.

Количественное определение содержания эзомепразола магния тригидрата (в мкг) в хроматографируемом объеме раствора анализируемой пробы проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

Примечание. Фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в смеси: спирт этиловый 96%-й, фосфатный буферный раствор с рН 11,0 и вода особо чистая в соотношении 1:4:20 (по объему) вспомогательных веществ, входящих в состав препаративных форм эзомепразола.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию эзомепразола магния тригидрата в воздухе рабочей зоны С, , вычисляют по формуле:

, где (2)

а - содержание вещества в хроматографируемом объеме раствора анализируемой пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

В - общий объем раствора анализируемой пробы, ;

б - хроматографируемый объем раствора анализируемой пробы, ;

- объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям (прилож. 1).

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

, где (3)

, - результаты параллельных определений массовой концентрации эзомепразола магния тригидрата в воздухе, ;

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного химического анализа представляют в виде:

, при Р = 0,95, где

- среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, ;

- границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

Если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация эзомепразола магния тригидрата менее 0,005 (более 0,05 )".

13. Контроль результатов измерений

13.1. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью по формуле:

, где (4)

, - средние значения массовой концентрации эзомепразола магния тригидрата, полученные в первой и второй лабораториях, ;

-значение критической разности, % (табл. 1).

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 (п. 5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 (п. 5.3.4).

13.2. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-02, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 и показателя правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-02.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А.Ю. Попова