Приложение H (обязательное). Оценка утечки силикона из имплантата молочной железы методом in vitro

Приложение H
(обязательное)

Оценка утечки силикона из имплантата молочной железы методом in vitro

Н.1 Принцип

Испытание состоит из погружения имплантатов при перемешивании в аналог биологической жидкости (SBF-раствор) при температуре (37  2) °С. Эта процедура in vitro должна имитировать рН- и ионную концентрацию плазмы крови человека (состав SBF приведен в Н.2.2) и оценивать количество силикона, выделяемое в течение 60 дней (+ 10 дней, если необходимо).

Определение количества силикона, выделяемого имплантатом, основано на измерении элементарного кремния в образцах SBF, регулярно берущихся из раствора. Анализы выполняют с помощью оптической эмиссионной спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой (ОЭС-ИСП).

В конце исследования результаты обрабатывают, чтобы выразить общее количество силикона, выделенного имплантатом, как функцию следующих элементов:

- очный объем SBF-раствора, окружающего имплантат;

- точный объем, взятый из раствора для измерения количества кремния;

- теоретическое соотношение кремния/силикона.

Н.2 Материал и аппаратура

Шейкер орбитальный. Вращение должно быть достаточно эффективным, чтобы позволить перемешивать имплантаты должным образом с наименьшим возможным контактом со стенкой контейнера.

Спектрометр оптический эмиссионный с индуктивно-связанной плазмой.

Раствор кремния стандартный.

SBF-раствор.

Контейнеры пластиковые герметичные. Контейнеры, используемые для проведения анализа, не должны взаимодействовать с SBF-раствором и иметь форму, позволяющую полностью погрузить имплантат в раствор с наименьшим возможным контактом со стенкой контейнера (объемом в 7-9 раз большим, чем объем грудного имплантата).

Н.2.1 Подготовка образца

Для того чтобы убедиться в том, что все имплантаты занимают одинаковый объем и надлежащим образом погружены в раствор SBF, наполняемые имплантаты должны быть заполнены физиологическим раствором до их номинальных объемов.

Н.2.2 Аналог биологической жидкости SBF

Состав аналога биологической жидкости, ммоль/л, должен соответствовать составу, приведенному в таблице Н.1.

Таблица Н.1 - Состав аналога биологической жидкости

Na+	142,0
K+	5,0
Mg2+	1,5
Са2+	2,5
Cl-	147,8
НСО3-	4,2
НРO42-	1,0
SO42-	0,5

Н.2.3 Приготовление раствора SBF

Растворяют каждую соль отдельно в 100 мл воды. Смешивают вместе все растворы, за исключением раствора хлорида кальция, который должен быть добавлен в последнюю очередь.

Н.2.4 Подготовка материала

Пластиковые контейнеры, применяемые для проведения исследования, должны быть очищены перед использованием, чтобы обеспечить удаление любой антиадгезивной силиконовой смазки, используемой при их изготовлении, а также других загрязняющих веществ. Заполняют контейнеры раствором моющего средства, плотно закрывают и перемешивают содержимое на орбитальном шейкере, затем тщательно промывают водой и высушивают тканью.

Н.3 Процедура

Проводят отбор восьми образцов в 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60 и 70-й день ( 2 дня).

Если один из образцов выходит за пределы диапазона, взятие другого осуществляется на следующий день (так Т может быть + 3 дня).

Н.3.1 Условия определения выделения силикона и измерения количества кремния

Испытание следует проводить на трех имплантатах объемом (220  20) мл.

Имплантат (наполненный силиконовым гелем или физиологическим раствором) объемом V, мл, помещают в пластиковый контейнер. Добавляют SBF-раствор объемом (6  0,03) V.

Плотно закрывают контейнер и перемешивают на орбитальном шейкере в течение 1 ч. Берут на анализ 10 мл SBF и добавляют в контейнер тот же объем свежего раствора SBF. Первое взятие образцов соответствует данным T = 0 для каждого испытуемого имплантата.

Контейнер затем помещают в термостат с постоянной температурой (37   2) °С и каждый день перемешивают в течение 10 мин на орбитальном шейкере.

Каждые 10 дней берут по 10 мл SBF для анализа на ИСП-ОЭС и добавляют такой же объем свежего SBF.

Также можно взвешивать контейнер с SBF и имплантатом каждый раз при взятии 10 мл для анализа и затем добавлять SBF до тех пор, пока не будет получена начальная масса. Эта процедура восполняет потерянный при работе с устройством объем SBF.

Каждые 10 дней берут по 10 мл SBF для анализа на ИСП-ОЭС и добавляют такой же объем свежего SBF. Таким образом, взятие образцов выполняют шесть раз на 10, 20, 30, 40, 50 и 60-й день ( 2 дня). Если один из образцов выходит за пределы диапазона, взятие другого осуществляют на следующий день (так T может быть + 3 дня).

Анализ кремния следует осуществлять в течение 1 ч после забора образца из реакционной среды.

Перед каждой серией измерений спектрограф должен быть откалиброван по стандартным растворам кремния, приготовленным в SBF из 1000 мкг/мл стандартного раствора в воде. Концентрация этих стандартных растворов зависит от результатов предыдущих анализов.

Выбранный стандарт кремния должен быть сертифицирован в аккредитованной лаборатории.

Н.3.2 Отображение результатов

Каждый образец должен быть проанализирован несколько раз, чтобы получить среднюю концентрацию кремния и стандартное отклонение для каждого периода времени.

Для каждого типа имплантата результаты должны быть выражены в массе кремния и массе силикона, выделившегося из имплантата, в зависимости от времени.

Если

V - объем SBF-раствора, добавленного в 0-й день;

х₀ - концентрация кремния, измеренная в 0-й день, мкг/мл;

\/_Р1 - объем, взятый на 10-й день;

х₁ - концентрация кремния, измеренная на 10-й день, мкг/мл;

V_P2 - объем, взятый на 20-й день;

х₂ - концентрация кремния, измеренная на 20-й день, мкг/мл.

Количество кремния X, мг, в растворе следует определять следующим образом:

в 0-й день Х, мг = (х₀  V)/1 000;

на 10-й день Х мг = (х₁  V)/1 000 + (х₀  V_Р1)/1 000;

на 20-й день Х мг = (х₂  V)/1 000 + (х₁  V_Р2)/1 000;

и т.д.

Наклон кривой соответствует среднему количеству кремния, выделившегося за день, в зависимости от времени.

Элементарный кремний, показанный ИСП-ОЭС, должен быть преобразован в общее количество силикона. Это преобразование делается для определения общего количества полидиметилсилоксана, выделившегося из отдельных имплантатов. Концентрацию, моль/мг, рассчитывают исходя из концентрации кремния (миллионная доля) к массе, мг, силикона.

Значение соотношения силикон/кремний вычисляют из теоретического коэффициента, указанного в 12-м издании Merck Index (часть Диметикон) с формулой [-(CH₃)₂Si-O-]: кремний 2,64 = силикон.

Примечание - Известно, что силикон является не единственным источником кремния в имплантате. Следовательно, данный расчет не отражает фактическое выделение силикона.