Временные методические указания по лабораторной диагностике аденоматоза овец и коз (утв. Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 2 июля 1985 г.)

1. Общие положения.

1.1. Аденоматоз овец и коз - вирусная, медленно протекающая болезнь, характеризующаяся образованием в легких железистоподобной ткани (опухоли).

1.2. Лабораторные исследования на аденоматоз включают: выявление специфических антител в сыворотках крови больных животных в реакции радиальной иммунодиффузии (РИД); обнаружение патологоморфологических изменений в легких гистологическим методом.

1.3. В лабораторию для исследования на аденоматоз направляют: сыворотку крови в количестве 3-5 мл от больного животного, патологический материал от павших или убитых животных (кусочки пораженной ткани легкого).

2. Выявление специфических противоаденоматозных антител в реакции радиальной иммунодиффузии.

2.1. Для исследования используют неинактивированные сыворотки, которые разрешается хранить (до постановки с ними реакции) при температуре 4-8°С не более 2-3 дн. или при минус 20°С в течение месяца (при однократном замораживании).

2.2. Для постановки РИД применяют 2,6%-ный гель агара (пищевой по ГОСТ 16280-70), приготовленный на 7,2%-ном растворе хлористого натрия. Для этого к 100 мл 7,2%-ного раствора хлористого натрия добавляют 2,6 г агара. Взвесь нагревают на медленном огне до исчезновения крупинок, а затем полученный раствор агара в горячем виде разливают в стерильные пробирки по 6 мл.

2.3. Реакцию ставят на стеклянной пластинке размером 9х12 . Перед постановкой компоненты набора для диагностики аденоматоза овец и коз растворяют стерильным 0,85%-ным раствором хлористого натрия, pH 7,2-7,4. Для этого в ампулу (флакон) с антигеном добавляют 4 мл, а в ампулы (флаконы) со специфической гипериммунной и нормальной сыворотками - по 0,5 или 0,25 мл раствора (в зависимости от объема сывороток, указанного на этикетках).

2.4. Агаровый гель, разлитый в пробирки, расплавляют в водяной бане, охлаждают до 50°С, быстро смешивают с 4 мл специфического антигена, подогретого до этой же температуры, и выливают на теплую стеклянную пластину, установленную строго горизонтально. Кончиком стерильного скальпеля его равномерно распределяют по пластине и оставляют для застывания при комнатной температуре.

2.5. В застывшем агаре пробойником делают лунки диаметром 3 мм, соблюдая между ними расстояние не менее 7 мм. На одной пластине можно сделать 54 лунки (6 - по ширине и 9 - по длине, используя трафарет для их размещения). Агар из лунок удаляют с помощью иглы.

2.6. Постановка реакции. Лунки заполняют исследуемыми неразведенными сыворотками до исчезновения мениска. Нельзя допускать растекания сыворотки по поверхности агара. Для каждой сыворотки используют новую пастеровскую пипетку.

Для контроля на каждой пластине первые две лунки заполняют специфической и нормальной (отрицательной) сыворотками. Затем пластины помещают во влажную камеру (большой стерилизатор, дно которого покрывают ватой, смоченной 0,5%-ным раствором фенола) и инкубируют при 37°С в течение суток.

2.7. Учет реакции проводят через 24 ч в проходящем свете осветителя, имея в виду, что при положительной реакции вокруг лунки образуется мутное (молочного цвета) кольцо преципитации, которое может быть в виде ободка, широкого кольца или ободка, отстоящего от лунки на некотором расстоянии. При отрицательных результатах исследований кольцо преципитации не образуется.

В контроле с положительной (специфической) сывороткой должно наблюдаться четкое кольцо преципитации. С нормальной (отрицательной) сывороткой кольцо преципитации должно отсутствовать.

При получении неудовлетворительных результатов в контроле исследования повторяют.

3. Патологоанатомические исследования.

3.1. Поступивший патологический материал (кусочки легких) уплотняют в целлоидине, парафине или используют метод замораживания, готовят гистосрезы и окрашивают их гематоксилин-эозином.

3.2. В положительных случаях при микроскопическом исследовании препаратов из пораженных участков легких обнаруживают структуры, сходные с аденокарциномой: вместо плоских эпителиальных клеток альвеол и бронхиол - кубические и цилиндрические (опухолевые) клетки, а также в просветах альвеол и бронхиол - сосочковидные разрастания опухолевой ткани, образующие структуры, напоминающие железистый орган. Просветы альвеол и бронхиол бывают заполнены разросшимся папилломатозным эпителием. Соединительнотканная основа слизистой оболочки бронхов и перибронхиальная ткань утолщены за счет инфильтрации ее лимфоцитами, плазмоцитами и фибробластами, в затяжных случаях - склерозирована.

3.3. Обнаружение в гистопрепарате из легких железистоподобных структур, сходных по строению с аденокарциномой, является основанием для постановки патогистологического диагноза на аденоматоз.

4. Диагноз на аденоматоз овец и коз считается подтвержденным лабораторными исследованиями при обнаружении в патологическом материале характерных для этой болезни патогистологических изменений и положительных результатов исследования сывороток крови от этих же животных или от животных из этой же группы в реакции радиальной иммунодиффузии.

5. При оздоровлении неблагополучных хозяйств больных аденоматозом овец и коз выявляют путем серологических исследований.

6. Сроки исследований: серологических - 2-3 дня, патоморфологических - 10-14 дн.