Методические рекомендации МР 1.2.0301-22 "Алгоритм и критерии экспертной оценки генотоксической активности химических веществ" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 6 октября 2022 г.)

Методические рекомендации МР 1.2.0301-22
"Алгоритм и критерии экспертной оценки генотоксической активности химических веществ"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 6 октября 2022 г.)

Введены впервые

I. Область применения

1.1. Настоящие методические рекомендации (далее - МР) определяют алгоритм оценки генотоксичности веществ разных химических классов при проведении токсиколого-гигиенической экспертизы.

1.2. МР предназначены для специалистов органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы медицинскими, научно-исследовательскими и иными организациями, занимающимися оценкой опасности химических веществ на всех этапах их обращения.

II. Общие положения

2.1. Генотоксичность - это способность химических, физических и биологических факторов влиять на целостность генетических структур в клетках (вызывать повреждения, изменять структуру, информационное содержание или сегрегацию ДНК). Результаты испытаний на генотоксичность используются в качестве индикаторов мутагенных последствий и оценки опасности веществ по критерию "мутагенность".

2.2. Для выявления генотоксичности химического вещества рекомендуется использовать набор тестов, с помощью которых оцениваются разные типы генетических нарушений и делается заключение о его генотоксическом потенциале. Важным аспектом при оценке генотоксичности является обеспечение объективной интерпретации полученных данных, особенно в случаях противоречивых результатов, получаемых в разных тестах, обусловленных, с одной стороны, разными уровнями компетентности лабораторий, а с другой - возможностями и ограничениями каждого конкретного метода. Различия в трактовке имеющихся данных приводят к неоднозначным экспертным заключениям в отношении генотоксичности веществ.

2.3. МР описывают проведение токсиколого-гигиенической экспертизы генетической опасности химических веществ на основе гармонизированных с международными подходами к исследованию генотоксичности и унифицированных критериев, разработанных для оценки качества проведенных исследований и принятия решения о наличии/отсутствии генотоксической активности.

III. Описание алгоритма проведения токсиколого-гигиенической экспертизы генетической опасности химических веществ

3.1. Токсиколого-гигиеническая экспертиза генетической опасности химических веществ проводится по представленным материалам, содержащим полное описание методик проведения исследований генотоксичности и результаты, полученные в экспериментах.

3.2. Экспертиза осуществляется в 2 этапа.

3.2.1. Первый этап включает оценку качества выполненных исследований в соответствии с критериями, приведенными в пунктах 3.2.1.1 и 3.2.1.2.

3.2.1.1. Материалы с результатами экспериментов принимаются к рассмотрению, если удовлетворяются следующие основные критерии:

- эксперименты проводятся в аккредитованной испытательной лаборатории;

- лаборатория, проводившая исследование, имеет подтвержденный опыт, достаточный для проведения анализа (имеет историческую базу данных, полученных не менее чем в 20 экспериментах, проведенных в сопоставимых условиях). Если лаборатория имеет небольшой опыт работы, то она демонстрирует способность воспроизводить результаты из опубликованных данных не менее чем для 2 веществ положительного контроля (включая слабые ответы, индуцированные низкими дозами веществ положительного контроля);

- проведение эксперимента осуществляется в соответствии с методическими документами ¹;

------------------------------

¹_{Например, МУ 1.2.3364-16 "Оценка мутагенной активности пестицидов", утвержденные Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 04.07.2016 (далее - МУ 1.2.3364-16); ГОСТ 32376 "Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Метод оценки обратных мутаций на бактериях" (далее - ГОСТ 32376); ГОСТ Р 57130 "Лекарственные средства для медицинского применения. Исследование генотоксичности и интерпретация полученных данных" (далее - ГОСТ Р 57130), ГОСТ 34660 "Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Микроядерный анализ на эритроцитах млекопитающих" (далее - ГОСТ 34660).}

------------------------------

- выбором тест-объектов и методов исследования in vitro и in vivo оцениваются разные типы генетических повреждений (повреждения молекул ДНК, генные, хромосомные, геномные мутации), методы в рамках каждого изучаемого типа генетических нарушений являются взаимозаменяемыми;

- подробно описывается подготовка вещества для его исследования, обосновывается выбор растворителя;

- приводятся данные об используемых видах и линиях животных, штаммах микроорганизмов, культурах клеток и условиях их содержания или культивирования;

- обосновывается и описывается путь/способ введения вещества;

- приводится обоснование выбора количества и уровней доз/концентраций:

- в экспериментах in vitro используется не менее 5 концентраций: в качестве максимальной концентрации в случае веществ с высокой цитотоксичностью выбирается максимальная нецитотоксичная концентрация; в качестве наименьшей концентрации в случае нецитотоксичных веществ - 5 мг/чашка, 5 мг/см ³, 5 мкл/см ³ или 0,01 М;

- в экспериментах in vivo - не менее 3 доз; максимальные дозы для лабораторных животных не должны превышать максимально переносимую дозу (далее - МПД), а в случае малотоксичных веществ выбирается доза 2000 мг/кг массы тела (далее - МТ);

- представляются данные исторических отрицательных и положительных контролей в лаборатории;

- значения отрицательного и положительного контролей в экспериментах не выходят за пределы диапазонов, полученных таким же методом другими лабораториями, согласно опубликованным данным;

- проводится оценка статистической значимости результатов, зависимости эффектов от дозы и сравнение распределения полученных в эксперименте данных с распределением в историческом контроле (определяется, выходят ли показатели, полученные в эксперименте, за контрольные пределы распределения в историческом отрицательном контроле), а также биологической значимости эффекта;

- результаты воспроизводятся в повторных экспериментах.

3.2.1.2. Учитываются и дополнительные критерии, специфичные для каждого конкретного метода. Пример приведен в приложении 2 к настоящим МР.

3.2.1.3. Материалы не принимаются для рассмотрения, если указанные выше требования не удовлетворяются.

3.2.2. На втором этапе оцениваются конкретные результаты, полученные разными методами, и на основании данных о генотоксической активности принимается решение о наличии/отсутствии способности вещества вызывать мутации.

3.2.2.1. Решение принимается на основании результатов оценки генотоксичности методами in vitro и in vivo. Более весомыми считаются доказательства, полученные в условиях in vivo.

3.2.2.2. В разных тестах могут быть получены разные результаты, и возможны следующие варианты:

- в тестах in vitro (по оценке генных и хромосомных мутаций) и in vivo (например, в цитогенетическом анализе) получают отрицательные результаты - вещество не является мутагеном;

- в одном из 2 или более тестов in vitro получают положительный результат, при этом в условиях in vivo результат отрицательный и доказано, что вещество достигло органа-мишени, на котором проводится исследование, - вещество не является мутагеном;

- в 2 или более тестах in vitro получают положительный результат, но in vivo - отрицательный. Необходим 2-й тест in vivo (например, метод ДНК-комет). Если 2-й тест in vivo дает отрицательный результат, вещество не обладает мутагенной активностью; если результат положительный, тестируемое вещество является мутагеном;

- в одном из 2 или более тестов in vitro получается положительный результат, в остальных тестах in vitro отрицательный ответ, в условиях in vivo результат положительный - вещество является мутагеном;

- все тесты дают положительный результат - вещество является мутагеном.

3.3. Результаты рассмотрения материалов вносятся в протокол экспертной оценки генотоксичности химических веществ (приложение 1 к настоящим МР). Пример заполнения протокола приведен в приложениях 2 и 3 к настоящим МР.

3.4. На основании проведенного анализа представленных материалов выполняется классификация опасности химических веществ ².

------------------------------

²_{ГОСТ Р 57454 "Руководство по применению критериев классификации опасности химической продукции по воздействию на организм. Мутагенность"; MP 1.2.0235-21 "Гигиеническая классификация пестицидов и агрохимикатов по степени опасности", утвержденные Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 15.02.2021.}

------------------------------

Библиографические ссылки

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Федеральный закон от 19.07.1997 N 109-ФЗ "О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами".

3. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю), утвержденные Решением Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299.

4. СанПиН 2.1.3685-21 "Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания".

5. Р 1.2.3156-13 "Оценка токсичности и опасности химических веществ и их смесей для здоровья человека".

6. МУ 1.2.3364-16 "Оценка мутагенной активности пестицидов".

7. МР 1.2.0235-21 "Гигиеническая классификация пестицидов и агрохимикатов по степени опасности".

8. ГОСТ 32376 "Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Метод оценки обратных мутаций на бактериях".

9. ГОСТ Р 57454 "Руководство по применению критериев классификации опасности химической продукции по воздействию на организм. Мутагенность".

10. ГОСТ Р 57130 "Лекарственные средства для медицинского применения. Исследование генотоксичности и интерпретация полученных данных".

11. ГОСТ 34660 "Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Микроядерный анализ на эритроцитах млекопитающих".

12. ГОСТ 32423 "Классификация опасности смесевой химической продукции по воздействию на организм".

13. ГОСТ ИСО/МЭК 17025 "Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий".

14. ГОСТ 33044 "Межгосударственный стандарт. Принципы надлежащей лабораторной практики".