Методические указания МУК 4.1.768-99 "Методика количественного определения экзогенного фенола в биосредах (моча)" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 6 июля 1999 г.)

Методические указания МУК 4.1.768-99
"Методика количественного определения экзогенного фенола в биосредах (моча)"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 6 июля 1999 г.)

Дата введения: 6 сентября 1999 г.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений" и ГОСТа Р 1.5-92. Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение фенола в диапазоне концентраций 0,1-1,2 мкг/см3.

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 1.5-2012 "Стандартизация в Российской Федерации. Стандарты национальные. Правила построения, изложения, оформления и обозначения", утвержденный приказом Росстандарта от 23 ноября 2012 г. N 1147-ст

C6H5OH                                                 Мол. масса - 94,12

Фенол - бесцветные кристаллы с характерным запахом. Т_кип - 181,75°С, Т_плавл - 40,9°С. Фенол растворим в воде и органических растворителях. Фенол относится ко 2 классу опасности.

Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью результата измерений 12,6% при доверительной вероятности 0,95.

Сущность метода

Метод основан на перегонке фенола с водяным паром и фотометрическом определении по азокрасителю, образующемуся при взаимодействии фенола с диазотированным паранитроанилином.

Определению мешают крезолы.

Нижний предел измерения в объеме пробы - 0,05 мкг.

Длительность анализа - 30 мин.

Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы

При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

Средства измерений

Спектрофотометр СФ-26
Весы лабораторные ВЛР-200 аналит.		ГОСТ 24104-80Е
Шкаф сушильный ШСС-80 П УХЛ 4.2		ТУ 16.531.743-83
Секундомер "Агат"		ГОСТ 5072-79Е
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, предел измерения 0-100°С, цена деления 1°С		ГОСТ 215-73Е
Колбы мерные 2-100-2, 2-50-2,
2-25-2		ГОСТ 1770-74Е
Пипетки 4-2-1, 2-1-5, 6-2-10		ГОСТ 20292-74Е
Установка для перегонки с водяным паром (прилож. В)

Реактивы

Фенол ч. д. а.	ГОСТ 6417-72
Натрия карбонат х. ч.	ГОСТ 83-79
Натрия нитрит х. ч.	ГОСТ 4197-74
Паранитроанилин х. ч.	ТУ 6-09-06-545-75
Соляная кислота х. ч.	ГОСТ 3118-77
Щавелевая кислота ч.	ГОСТ 22180-76
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72

Требования к безопасности

Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям "Пожарных норм проектирования зданий и сооружений" (СНиП ПА-5-700) и "Санитарных норм проектирования промышленных предприятий" (СН-245-71) и СНиП-74.

При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.

ГАРАНТ:

Взамен ГОСТ 12.1.004-85 постановлением Госстандарта СССР от 14 июня 1991 г. N 875 с 1 июля 1992 г. введен в действие ГОСТ 12.1.004-91

При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях", утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М.,1981), и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением", утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).

При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.

При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на спектрофотометре.

Условия измерений

При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:

- температура воздуха (20 +- 5)°С;

- атмосферное давление 630-800 мм рт. ст.;

- влажность воздуха - не более 80 % при температуре 25°С.

Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.

Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

Приготовление растворов

Соляная кислота, 4%-ный раствор. 10,0 см3 концентрированной соляной кислоты (ро=1,19 г/см3) добавляют к 100,0 см3 дистиллированной воды.

Нитрит натрия, 25%-ный раствор. 25 г нитрита натрия растворяют в 100 см3 дистиллированной воды.

Паранитроанилин, 0,1%-ный раствор. 0,1 г паранитроанилина, предварительно высушенного при температуре 60°С в течение 2 х.ч, растворяют в 4%-ном растворе соляной кислоты в мерной колбе вместимостью 100 см3. Перед употреблением раствор охлаждают до 0-5°С.

Диазотированный паранитроанилин. 12,5 см3 охлажденного раствора паранитроанилина приливают в мерную колбу вместимостью 50 см3, прибавляют постепенно 2,5 см3 раствора нитрита натрия и через несколько минут доводят объем до 50 см3 дистиллированной водой. Диазотирование паранитроанилина следует проводить в вытяжном шкафу.

Щавелевая кислота, 10%-ный раствор. 10 г щавелевой кислоты растворяют в 100 см3 дистиллированной воды.

Исходный раствор для градуировочной характеристики, 1 мг/см3. В мерную колбу вместимостью 50 см3 помещают 20-30 см3 дистиллированной воды и точную навеску свежеперегнанного фенола 50 мг и доводят объем до 50 см3 дистиллированной водой.

Рабочий раствор для установления градуировочной характеристики с содержанием фенола 10 мкг/см3 готовится путем разбавления перед отгонкой.

Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности от концентрации фенола в пробе, устанавливают по 3 сериям растворов.

Растворы для градуировки готовят в мерных колбах вместимостью 100 см3. Для этого в каждую колбу вносят раствор согласно таблице.

Таблица

Стандартные смеси для установления градуировочной характеристики при определении концентрации фенола (фрагмент шкалы)

Номер смеси для градуировки	1	2	3	4	5
Объем рабочего раствора (10,0 мкг/см3), см3	1,6	2,0	4,0	8,0	16,0
Содержание фенола, мкг/см3	0,16	0,20	0,40	0,80	1,60

Для установления градуировочной характеристики в колбу для перегонки помещают 5 см3 стандартного раствора, добавляют щавелевую кислоту до кислой реакции среды по лакмусовой бумаге и проводят перегонку с водяным паром. Отгоняют 10 см3 пробы. К отгону объемом 5 см3 добавляют 0,04 г карбоната натрия и тщательно перемешивают, затем добавляют 0,4 см3 диазотированного паранитроанилина и через 20 мин замеряют оптическую плотность на спектрофотометре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при 494 нм.

Отбор проб

Отбор проб мочи в объеме 100 см3 производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.

Выполнение измерений

Для анализа берут 5 см3 мочи, наливают в колбу для перегонки, добавляют щавелевую кислоту до кислой реакции среды по лакмусовой бумаге и ведут перегонку с водяным паром. Из полученного отгона отбирают 5 см3 пробы, добавляют 0,04 г карбоната натрия и тщательно перемешивают, затем добавляют 0,4 см3 раствора диазотированного паранитроанилина. Содержимое пробирки вновь энергично встряхивают и через 20 мин замеряют оптическую плотность растворов в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при 494 нм.

Вычисление результатов измерений

Концентрацию (С) фенола в моче (мкг/см3) вычисляют по формуле:

                       С  х V

                        1    2

                  C = ---------, где

                         V

                          1

     С  -концентрация вещества по градуировочному графику, мкг/см3;

      1

     V  - объем мочи, взятой для перегонки, см3;

      1

     V  - объем перегнанной пробы, см3.

      2

Внутренний оперативный контроль

Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).

ГАРАНТ:

Взамен МИ 2335-95 Госстандартом России введена в действие с 1 октября 2003 г. рекомендация МИ 2335-2003

Оперативный контроль сходимости

Периодичность контроля сходимости измерений зависит от количества рабочих измерений (2 параллельные пробы). Отбирают 2 пробы мочи и каждую из них анализируют в соответствии с прописью методики.

Результаты признаются удовлетворительными, если выполняется условие:

                    |C -C | >= 0,01d x C  , где

                      1  2              ср

     С  и С - результаты анализа 1 и 2 проб;

      1    2

     d - допустимое  расхождение  между двумя результатами одной и той же

пробы (d = 35%);

     С  - среднее значение между двумя определениями.

      ср

Оперативный контроль точности

Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.

Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50-150%. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой Х'. Результаты анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой X' получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:

                  |Х' - Х - С| < К , где

                                  д

     С - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией, мкг/см3;

     К  - норматив оперативного контроля погрешности, мкг/см3.

      д

При внешнем контроле (Р = 0,95) принимают

                                     2           2

                К  = кв.корень Дельта х' + Дельта х, где

                 д

           2           2

     Дельта х' и Дельта х - характеристики   погрешностей   для  исходной

пробы и пробы с добавкой, мкг/см3.

            Дельта х' = 0,165 х Х' и Дельта х  = 0,165 х X

При внутрилабораторном контроле (Р = 0,90) принимают, что

                   К'  = 0,84 х К

                    д            д

При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.