Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 54014-2010 "Продукты пищевые функциональные. Определение растворимых и нерастворимых пищевых волокон ферментативно-гравиметрическим методом" (утв. приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. N 624-ст)

Functional food. Determination of soluble and insoluble dietary fibres by enzymatic-gravimetric method

Дата введения - 1 января 2012 г.

Введен впервые

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения".

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на функциональные пищевые продукты и устанавливает метод определения общей массовой доли растворимых и нерастворимых пищевых волокон, в т.ч. гемицеллюлоз, целлюлозы, пектинов, резистентных крахмалов, лигнина и др.

Диапазон измерения массовой доли пищевых волокон от 1% до 30% массы обезжиренного вещества.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 8.563-96 Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений

ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2006 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ Р 51418-99 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения массовой доли золы, нерастворимой в соляной кислоте

ГОСТ Р 52349-2005 Продукты пищевые. Продукты пищевые функциональные. Термины и определения

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ Р 51418-99 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения массовой доли золы, нерастворимой в соляной кислоте

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 200-76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый 1-водный. Технические условия

ГОСТ 245-76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5901-87 Изделия кондитерские. Методы определения массовой доли золы и металломагнитной примеси

ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификованный. Технические условия

ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 11773-76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый двузамещенный. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 15113.8-77 Концентраты пищевые. Методы определения золы

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25555.4-91 Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения золы и щелочности общей и водорастворимой золы

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 26889-86 Продукты пищевые и вкусовые. Общие указания по определению содержания азота методом Кьельдаля

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52349.

4 Сущность метода

Метод основан на ферментативном гидролизе крахмальных и некрахмальных соединений с помощью -амилазы, протеазы и амилоглюкозидазы до моно-, ди-, олигосахаридов и пептидов. Пищевые волокна осаждают этиловым спиртом, высушивают и определяют гравиметрическим методом. Общую массовую долю пищевых волокон выражают в процентах (г/100 г).

5 Реактивы, стандартные вещества и растворы

Все реактивы, используемые для анализа, должны быть квалификации чистые для анализа (ч.д.а.). Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллированной# .

* термостабильная удельной активностью 10 ед./мг по [1].

Протеаза* удельной активностью 7 - 15 ед./мг по [1],

Амилоглюкозидаза* удельной активностью 400 ед./мг по [1].

Эфир петролейный.

Этиловый спирт 95% об. по ГОСТ 5962.

Этиловый спирт 78% об.: смешать 207 дистиллированной воды по ГОСТ 6709 и 793 этанола 95% об. по ГОСТ 5962.

Раствор фосфатного буфера 0,08 , рН 6,0: растворяют 1,4 г динатрий гидрофосфата () по ГОСТ 245 или 1,752 г динатрий гидрофосфата дигидрата () по ГОСТ 200 и 9,68 г натрия дигидрофосфата моногидрата () по ГОСТ 11773 в 700 воды, доводят рН до 6,0 с помощью гидроокиси натрия (NaOH) по ГОСТ 4328 или фосфорной кислоты () по ГОСТ 6552, разбавляют водой по ГОСТ 6709 до 1000 .

Раствор гидроокиси натрия (NaOH) 0,275 : разбавляют 275 раствора гидроокиси натрия 1 водой до 1000 .

Раствор соляной кислоты (HCI) 0,325 : разбавляют 325 концентрированной соляной кислоты 1 дистиллированной водой до 1000 .

Ацетон по ГОСТ 2603.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

6 Средства измерений и оборудование

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228.

Фильтры бумажные обеззоленные диаметром 15 см по ГОСТ 12026.

Шкаф сушильный, обеспечивающий температуру от 60°С до 110°С.

Эксикатор по ГОСТ 25336.

Стаканы химические вместимостью 400 по ГОСТ 25336.

Баня водяная с терморегулятором для поддержания температуры ()°С, оборудованная качалкой или магнитной мешалкой.

рН-метр с погрешностью измерения не более 0,1 ед. рН.

Дозаторы пипеточные с объемом доз 0,05 и 0,5 .

Цилиндры мерные вместимостью 50 и 500 по ГОСТ 1770.

Насос водоструйный стеклянный лабораторный по ГОСТ 25336.

Печь муфельная с терморегулятором для поддержания температуры ()°С.

Фольга алюминиевая.

Мельница лабораторная или ступка.

Допускается использование других средств измерений с метрологическими характеристиками и лабораторного оборудования с техническими характеристиками, не уступающими перечисленным выше.

7 Отбор и подготовка проб

Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26313, 26671 и 26809.

8 Подготовка к испытанию

При необходимости пробу измельчают в гомогенизаторе или лабораторной мельнице. Если содержание жира в пробе превышает 5%, его экстрагируют петролейным эфиром из расчета 25 на 1 г пробы. Обезжиренный образец высушивают в сушильном шкафу в течение одного часа при температуре 70°С и помещают в эксикатор.

9 Проведение испытания

При проведении испытания избегают загрязнений, связанных с поглощением пробой дополнительной влаги.

9.1 Берут две навески пробы массой 1 г (с точностью до 0,0001 г) в стеклянные стаканы вместимостью 400 и добавляют в каждый по 50 фосфатного буфера рН 6,0.

9.2 Испытание

9.2.1 С помощью пипеточного дозатора в каждый стакан вносят по 0,05 раствора термостабильной -амилазы по [1].

Содержимое перемешивают, слегка вращая стаканы, после чего стаканы закрывают алюминиевой фольгой и помещают в кипящую водяную баню. Время выдержки 30 мин отсчитывают с момента, когда содержимое нагреется до температуры 90°С. Затем смесь охлаждают до температуры 20°С и доводят значение рН до 7,4 - 7,6 раствором гидроокиси натрия молярной концентрации 0,275 .

9.2.2 В каждый стакан вносят 0,05 раствора протеазы по [1] с помощью пипеточного дозатора. Содержимое стаканов перемешивают и закрывают алюминиевой фольгой, выдерживают на водяной бане при температуре 60°С в течение 30 мин при постоянном перемешивании, охлаждают до 20°С и доводят значение рН до 4,3 - 4,7 с помощью раствора соляной кислоты 0,325 .

9.2.3 Затем в каждый стакан с помощью пипеточного дозатора вносят 0,150 раствора амилоглюкозидазы по [1], выдерживают на водяной бане при температуре 60°С в течение 30 мин, отсчитывая время с момента, когда температура содержимого стаканов достигнет 60°С.

9.2.4 Мерным цилиндром отмеряют 280 этилового спирта 78% об., подогревают его до температуры 60°С, добавляют к содержимому стаканов и выдерживают при комнатной температуре в течение 60 мин для формирования осадка.

9.2.5 Высушенные при температуре 60°С до постоянной массы (разница между взвешиваниями не должна превышать 0,001 г) и взвешенные (с точностью до 0,0001 г) бумажные фильтры помещают в стеклянные воронки и смачивают этиловым спиртом 95% об., осадок, содержащий пищевые волокна, фильтруют количественно, смывая со стенок стаканов порциями этилового спирта, затем осадок на фильтре промывают три раза порциями этилового спирта 78% об. по 20 , два раза порциями этилового спирта 95% об. по 10 и два раза порциями ацетона по 10 .

9.2.6 Осадки на фильтрах высушивают при температуре 105°С в сушильном шкафу до постоянной массы (разница между взвешиваниями не должна превышать 0,001 г). Фильтры охлаждают в эксикаторе и взвешивают с точностью до 0,0001 г.

9.2.7 В одном из двух осадков определяют содержание азота методом Кьельдаля по ГОСТ 26889. Полученное значение умножают на 6,25, получая содержание белка. Во втором осадке в зависимости от вида функционального пищевого продукта определяют содержание золы по ГОСТ 5901, ГОСТ 15113.8, ГОСТ 25555.4 или ГОСТ Р 51418.

9.3 Число параллельных определений

Выполняют два независимых определения в двух различных пробах одного и того же образца.

10 Обработка результатов

Общую массовую долю пищевых волокон X, %, от массы обезжиренного сухого вещества вычисляют по формуле

,

(1)

где - масса навески сухой обезжиренной пробы, г;

- масса осадка, г;

- массовая доля белка в осадке, % (ГОСТ 26889), вычисляемая по формуле

;

- массовая доля золы в осадке, % (ГОСТ 5901, ГОСТ 15113, ГОСТ 25555.4 или ГОСТ Р 51418), вычисляемая по формуле

,

где - масса белка, г (ГОСТ 26889);

- масса золы, г (ГОСТ 5901, ГОСТ 15113, ГОСТ 25555.4 или ГОСТ Р 51418).

Результат приводят с точностью до 0,01 г пищевых волокон на 100 г обезжиренного сухого вещества.

11 Метрологические характеристики метода

11.1 Повторяемость

Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных для одной и той же пробы в одной лаборатории одним сотрудником, не должно превышать 10% от их среднеарифметического значения (при Р = 0,95).

11.2 Воспроизводимость

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений, выполненных для одной и той же пробы в двух различных лабораториях, не должно превышать 0,1 г пищевых волокон на 100 г пробы (при Р = 0,95).

11.3 Контроль стабильности результатов измерений при реализации методики в лаборатории

Контроль стабильности результатов измерений в лаборатории осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-6, используя метод контроля стабильности стандартного отклонения промежуточной прецизионности по ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 6.2.3) с применением контрольных карт Шухарта. Периодичность контроля и процедуры контроля стабильности результатов измерений должны быть предусмотрены в руководстве по качеству лаборатории в соответствии с ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025 (подраздел 4.2) и ГОСТ Р 8.563 (пункт 7.1.1).

12 Требования безопасности

При проведении испытания следует соблюдать требования электробезопасности по ГОСТ 12.1.018, ГОСТ 12.1.019 и инструкции по эксплуатации лабораторного оборудования.

При работе с чистыми веществами следует соблюдать требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007.

Контроль за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны следует проводить в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005.

13 Условия проведения испытания

При подготовке и проведении испытания должны быть соблюдены следующие условия:

- температура окружающей среды от 10°С до 25°С включительно;

- относительная влажность воздуха от 40% до 70% включительно.

Библиография

[1]	Номенклатура ферментов. Рекомендации Международного биохимического союза по номенклатуре и классификации ферментов, а также единицам ферментов и символам кинетики ферментативных реакций. - М., 1979.

______________________________

* Допускается использование имеющихся в продаже готовых наборов реактивов (ферментов) для определения общих пищевых волокон (например, фирмы MERCK - Gesamtballastoffe 12979) при условии соответствия качества реагентов требованиям настоящего стандарта. Указанный пример реактивов является рекомендуемым для применения. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что стандарт устанавливает обязательное применение данного набора реактивов.