Методические указания МУК 4.1.2911-11 "Определение остаточных количеств Римсульфурона в плодах томата и томатном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 12 июля 2011 г.)

Методические указания МУК 4.1.2911-11
"Определение остаточных количеств Римсульфурона в плодах томата и томатном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 12 июля 2011 г.)

Дата введения: с момента утверждения

Свидетельство о метрологической аттестации N 0068.03.12.10 от 08.12.2010.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Римсульфурона в диапазоне 0,02-0,2 мг/кг в плодах томата и в томатном соке.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 1-(4,6-диметоксипиримидин-2-ил)-3-(3-этилсульфонил-2-пиридилсульфонил) мочевина:

Структурная формула:

Молекулярная масса: 431,4.

Эмпирическая формула: .

Агрегатное состояние: бесцветные кристаллы.

Цвет, запах: химически чистый Римсульфурон представляет собой белый порошок без запаха.

Давление паров мПа (при 25°С).

Коэффициент распределения октанол-вода (25°С): logP=0,288 (pH 5), - 1,47(pH 7).

рКа - 4,0.

Температура плавления: 176-178°С.

Плотность: 0,784 .

Растворимость в воде (25°С): 0,135 (рН 5), 7,3 (рН 7), 5,56 (рН 9).

В воде гидролизуется (при 25°С): 4,6 дня (рН 5), 7,2 дня (pH 7), 0,3 дня (рН 9).

Растворимость в органических растворителях ( при 25°С): ацетон - 14,8, ацетонитрил - 17,2, этилацетат - 2,85, гексан < 0,01, метанол - 1,55, N,N-диметилформамид - 241,0, хлористый метилен - 35,5.

Римсульфурон быстро разлагается в почве. Подвергается главным образом химическому гидролизу и в очень малой мере микробиологической деградации. Скорость деградации зависит от рН, так как соединение стабильно в нейтральной среде и быстрее разлагается в щелочных и кислых почвах. в почве составляет 10-20 дней (в лабораторных условиях).

В растениях разлагается в течение нескольких часов: в кукурузе - 6 ч.

Краткая токсикологическая характеристика: Римсульфурон относится к мало опасным по острой пероральной ( для крыс более 5 000 мг/кг) и дермальной токсичности ( для кроликов более 2 000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности ( для крыс (4 ч) 5 400 ). Не вызывает покраснения кожи, слабо раздражает слизистую оболочку глаз.

Область применения препарата: Римсульфурон - гербицид системного действия, проникающий через корни и листья растений и ингибирующий биосинтез изолейцина и валина. Рекомендуется как послевсходовый гербицид для контроля однолетних и многолетних трав и некоторых широколистных сорняков на посевах кукурузы. Также используется на посадках картофеля и томатов. Хорошо подавляет развитие чувствительных к нему сорняков при норме расхода 15 г д.в./га.

Римсульфурон применяют также в виде смесевых препаратов в комбинации с клопиралидом, флуметсуламом, никосульфуроном, атразином, тифенсульфурон-метилом, метрибузином, тербутилазином.

В России для Римсульфурона установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,02 мг/кг массы тела человека; ПДК в воде водоемов - 0,002 ; ПДК в воде рыбохозяйственных водоемов - 0,5 ; МДУ (мг/кг): в кукурузе и картофеле - 0,01; в томатах и томатном соке - 0,05.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n =20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические параметры для Римсульфурона

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель точности (граница относительной погрешности), , % Р = 0,95	Стандартное отклонение повторяемости, , %	Предел повторяемости, r, %	Предел воспроизводимости, R, %
Плоды томата	0,02-0,1 вкл.	50	1,10	3,05	3,63
	0,1-0,2 вкл.	25	0,85	2,37	2,82
Томатный сок	0,02-0,1 вкл.	50	0,68	1,97	2,34
	0,1-0,2 вкл.	25	0,71	1,88	2,24

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для Римсульфурона

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Полнота извлечения вещества, %	Стандартное отклонение, S, %	Доверительный интервал среднего результата, , %
Плоды томата	0,02	0,02-0,2	75,13	3,02	1,06
Томатный сок	0,02	0,02-0,2	74,24	1,35	0,47

2. Метод измерений

Метод основан на определении Римсульфурона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием диодно-матричного детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на колонках с окисью алюминия и концентрирующих патронах Диапак С и Диапак С16.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Весы аналитические "OHAUS", ЕР 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-2001 - специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности 0,038 г "ACCULAB" V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-2001 - средний (III)
Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1 000	ГОСТ 1770-74
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 рН-метр/милливольтметр рН-150 0...14 рН; 1 999 мВ, номер госрегистрации N 10663	ГОСТ 29227-91
Хроматограф жидкостный Agilent 1200 LCMS с диодно-матричным детектором G1315В, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80°С и стандартным автосамплером для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему (1200 Series Autosampler с дозирующим объемом от 0,1 до 100 ); номер госрегистрации 16193-06
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50	ГОСТ 1770-74

Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Римсульфурон, CAS 122931-48-0, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,9%, фирма Dr. Ehreustorfer GmbH, аккредитованная по ИСО 9001:2000
Ацетон, осч	ТУ 6-09-3513-86
Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм	ТУ 6-09-2167-84
Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости)	ГОСТ 6709-72
Гелий, очищенный марки "А"	ТУ 51-940-80
n-Гексан, хч	ТУ 6-09-3818-89
Калий марганцовокислый, чда	ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч	ТУ 6-09-4711-81
Кислота муравьиная, чда	ГОСТ 5848-73
Кислота соляная, хч	ГОСТ 3118-77
Кислота уксусная, ледяная	ГОСТ 61-75
Концентрирующие патроны Диапак С и Диапак С16 (0,6 г), фирма "БиоХимМак СТ"	ТУ 4215-002-05451931-94
Метилен хлористый, хч	ТУ 6-09-2662-77
Натрий сернокислый, безводный, хч	ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, хч	ГОСТ 4233-77
Натрия гидрокарбонат, хч	ГОСТ 2156-76
Хлороформ, хч	ГОСТ 20015-88
Этилацетат, хч	ГОСТ 22300-76

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Алонж прямой с отводом для вакуума (АО-14/23) для работы с концентрирующими патронами Диапак С и Диапак С16	ГОСТ 25336-82
Аппарат для встряхивания проб "SKLO UNION TYP LT1"
Банки с крышками для экстракции на 250 , полипропилен, кат. N 3120-0250, фирма "NALGENE"
Ванна ультразвуковая "UNITRA" UNIMA OLSZTYN UM-4
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная	ГОСТ 5556-81
Воронки делительные на 250	ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные, стеклянные	ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма "Buchi"
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1 000	ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 и 4 000 ТС	ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RP18, зернение 5 мкм, фирма "Waters"
Насос диафрагменный FT.19, фирма "KNF Neu Laboport"
Предколонка хроматографическая стальная, Zorbax Eclipse XDB-C8, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернение 5 мкм, фирма "Agilent"
Стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100-500	ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4 000 и приемной конической колбой объемом 1 000
Фильтры бумажные, "красная лента"	ТУ-6-09-1678-86
Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма "Waters"
Центрифуга MPW-350e с числом оборотов 4 000 об./мин и с набором полипропиленовых банок емкостью 200
Шприц инъекционный однократного применения объемом 10	ГОСТ 24861-91 (ИСО 7886-84)

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (205)°С, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению определений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия, концентрирующих патронов Диапак С и Диапак С16 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак С и Диапак С16, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 . Выдерживают его над осушителем в течение 5-6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5°С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5°С отбрасывают.

7.1.2. Очистка ацетона

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 .

Ацетон перегоняют при температуре 56,2°С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2°С отбрасывают.

7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0°С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0°С отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ

В плоскодонную колбу объемом 1 000 помещают 400 ацетонитрила и 600 0,1%-го раствора муравьиной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 в течение 5 мин, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.

7.2.2 Приготовление рабочих растворов

7.2.2.1. Приготовление 0,1%-го раствора муравьиной кислоты.

В мерную колбу объемом 1 000 помещают 500 очищенной воды, 1 концентрированной муравьиной кислоты, перемешивают, после чего доводят объем до метки очищенной водой.

7.2.2.2. Приготовление 0,05 М раствора двузамещенного фосфорнокислого калия.

В мерную колбу на 500 мл переносят 5,7 г , добавляют 200-300 мл бидистиллированной воды, перемешивают до полного растворения осадка, доводят водой до метки, проверяют рН полученного раствора с помощью потенциометра. Если рН раствора менее 9, доводят его до указанного значения с помощью 1 М раствора едкого натра, контролируя рН с помощью потенциометра.

7.2.2.3. Приготовление 6 М раствора соляной кислоты.

Мерным цилиндром отбирают 246 концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 500 , куда предварительно наливают около 100 дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой). Готовый раствор хранят при комнатной температуре не более 30 суток.

7.2.3. Приготовление градуировочных растворов

7.2.3.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией Римсульфурона 1,0 .

Взвешивают 50 мг Римсульфурона в мерной колбе объемом 50 . Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.3.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией Римсульфурона 10,0 .

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 , помещают в мерную колбу объемом 100 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 2 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 2 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.3.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией Римсульфурона 1,0 .

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 , помещают в мерную колбу объемом 10 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 3 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 3 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.3.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией Римсульфурона 0,5 .

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 , помещают в мерную колбу объемом 10 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 4 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 4 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.3.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией Римсульфурона 0,2 .

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 , помещают в мерную колбу объемом 50 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 5 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 5 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.3.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией Римсульфурона 0,1 .

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 , помещают в мерную колбу объемом 100 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 6 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 6 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.3.7. Стандартные растворы Римсульфурона с концентрацией 2,0; 1,0; 0,4; и 0,2 для внесения в контрольные образцы.

Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,4; и 0,2 и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Римсульфурона в растворе (), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 .

В инжектор хроматографа вводят по 20 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Римсульфурона на них

7.4.1. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 (1-2 кап./с).

Патрон Диапак С устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 этилацетата, 5 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 8:2. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.4.2. Проверка хроматографического поведения Римсульфурона на концентрирующем патроне Диапак С

Из стандартного раствора Римсульфурона в ацетонитриле, содержащего 1 , отбирают 1 , помещают в концентратор объемом 100 и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30°С. Сухой остаток растворяют в 2 этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30°С, сухой остаток растворяют в 2 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60 и хроматографируют. Исходный концентратор обмывают последовательно 20 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 8:2, затем двумя порциями по 10 0,1%-й муравьиной кислоты в этилацетате, тщательно обмывая стенки концентратора, вносят на патрон.

Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в концентраторы объемом по 100 , выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С. Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60 и хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие Римсульфурон, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюента.

Изучение поведения Римсульфурона на концентрирующих патронах Диапак С проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

7.5. Подготовка концентрирующих патронов Диапак C16 для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Римсульфурона на них

7.5.1. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 (1-2 кап./с).

Патрон Диапак С16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 ацетонитрила, затем 15 воды. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.5.2. Проверка хроматографического поведения Римсульфурона на концентрирующих патронах Диапак С16

Из стандартного раствора Римсульфурона в ацетонитриле, содержащего 1 , отбирают 1 , помещают в концентратор объемом 100 и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30°С. Сухой остаток растворяют в 5 0,05 М раствора двузамещенного фосфата калия, помещают на 10 с на ультразвуковую ванну, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30°С, сухой остаток растворяют в 2 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60 и хроматографируют.

Исходный концентратор обмывают последовательно 10 0,005% уксусной кислоты, затем двумя порциями по 5 0,1% уксусной кислоты в ацетонитриле, полученные растворы последовательно вносят на патрон.

Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 , выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С, сухой остаток растворяют в 2 ацетонитрила и хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие Римсульфурон, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюента.

Изучение поведения Римсульфурона на концентрирующих патронах Диапак С16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

7.6. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Zorbax Eclipse устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30°С и скорости потока подвижной фазы 1 3-4 ч.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ Р 51810-2001 "Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети" и ГОСТ Р 52183-2003 "Консервы. Соки овощные. Сок томатный. ТУ".

ГАРАНТ:

Приказом Росстандарта от 8 декабря 2014 г. N 1949-ст ГОСТ Р 52183-2003 отменен с 1 января 2016 г. в связи с принятием и введением в действие ГОСТ 32876-2014 "Продукция соковая. Сок томатный. Технические условия"

Пробы плодов томата хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0-4°С не более суток.

Для длительного хранения пробы плодов томата замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18°С до 2 лет.

Пробы соков хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4°С не более 10 суток.

9. Подготовка проб и выполнение измерений

9.1. Плоды томата

9.1.1. Экстракция и очистка полученного экстракта

Образец измельченных плодов томата массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 , прибавляют 50 ацетонитрила и помещают на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 ацетонитрила и помещая каждый раз на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в делительной воронке объемом 250 .

К ацетонитрильному экстракту прибавляют 50 гексана и встряхивают делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний (ацетонитрильный) слой возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру еще раз, используя 50 гексана. Нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 и выпаривают досуха при температуре не выше 30°С.

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 2 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60, тщательно обмывают стенки концентратора, затем прибавляют 50 дистиллированной воды, 5 г хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 . Полученную водную фракцию промывают двумя порциями гексана по 30 , встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию переносят в чистую делительную воронку и доводят рН до значения 3,5 с помощью 6 М HCl.

Римсульфурон экстрагируют тремя порциями хлороформа объемом по 30 , встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлороформ) собирают в концентратор объемом 250 через слой безводного сульфата натрия толщиной 1 см и выпаривают досуха при температуре не выше 30°С.

9.1.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С

Сухой остаток, полученный в п. 9.1.2, растворяют в 2 этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 гексана, перемешивают и вносят на патрон. Исходный концентратор обмывают 20 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 8:2 и вносят на патрон. Элюаты отбрасывают, а патрон сушат под вакуумом 2 мин. Римсульфурон элюируют 10 0,1%-й муравьиной кислоты в этилацетате. Элюат собирают в концентратор объемом 100 , выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

9.1.4. Вторая очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.3, прибавляют 2 см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60, тщательно обмывают стенки колбы, затем прибавляют 30 дистиллированной воды, 3 г хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 . Полученную водную фракцию промывают двумя порциями гексана по 10 , встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию переносят в чистую делительную воронку и доводят рН до значения 3,5 с помощью 6 М HCl.

Римсульфурон экстрагируют тремя порциями хлороформа объемом по 10 , встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлороформ) собирают в концентратор объемом 250 через слой безводного сульфата натрия толщиной 1 см и выпаривают досуха при температуре не выше 30°С.

9.1.5. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16

Сухой остаток, полученный в п. 9.1.4, растворяют в 5 0,05 М раствора двузамещенного фосфата калия, помещают на 10 с на ультразвуковую ванну, перемешивают и вносят на патрон. Исходный концентратор обмывают 10 раствора 0,005% уксусной кислоты. Элюаты отбрасывают, а патрон сушат под вакуумом 2 мин. Римсульфурон элюируют 5 0,1%-й уксусной кислоты в ацетонитриле. Элюат собирают в концентратор объемом 100 , выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С, сухой остаток растворяют в 2 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60 и 20 пробы вводят в хроматограф.

9.2. Томатный сок

9.2.1. Экстракция

Образец томатного сока массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 , доводят рН до значения 3,5 с помощью 6 М HCl, прибавляют 30 хлористого метилена и помещают на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. После экстракции пробу центрифугируют 5 мин при скорости 4 000 об./мин. Экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 . Нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 через слой безводного сульфата натрия. Верхний слой сливают в банку для экстракции и центрифугирования, повторяют экстракцию еще два раза, используя по 30 см хлористого метилена и помещая на 5 мин на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют, экстракты переносят в делительную воронку, хлористый метилен объединяют в концентраторе объемом 250 , выпаривают досуха при температуре не выше 30°С.

9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Сухой остаток, полученный по п. 9.2.1, растворяют в 2 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60 и проводят очистку экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, как указано в п. 9.1.2.

9.2.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С и Диапак С16

Сухой остаток, полученный по п. 9.2.2 растворяют в 2 этилацетата и очищают на концентрирующих патронах Диапак С, как указано в п. 9.1.3 и на концентрирующих патронах Диапак С16, как указано в п. 9.1.5.

После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С. Сухой остаток растворяют в 2 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60 и 20 пробы вводят в хроматограф.

9.3. Условия хроматографирования

Хроматограф жидкостной Agilent 1200 LCMS с диодно-матричным детектором G1315B с изменяемой длиной волны, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80°С и стандартным автосамплером для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему (1200 Series Autosampler с дозирующим объемом от 0,1 до 100 ).

Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 250 мм х 4,6 мм, зернение 5 мкм, фирма "Waters".

Предколонка стальная Zorbax Eclipse XDB-C8, 12,5 мм х 2,1 мм, зернение 5 мкм, фирма "Agilent".

Температура колонки: 30°С.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,1%-я муравьиная кислота в соотношении 400:600.

Длина волны: 230 нм.

Время удерживания Римсульфурона: 9,707 мин 3%.

Объем вводимой пробы: 20 .

Чувствительность не менее 10 mAU (миллиединиц абсорбции) на шкалу.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2-20 нг.

10. Обработка результатов

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Agilent Technologies ChemStation for LC 3D.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание Римсульфурона рассчитывают по формуле:

, где

Х - содержание Римсульфурона в пробе, мг/кг;

- высота (площадь) пика стандарта, мм;

- высота (площадь) пика образца, мм;

А - концентрация стандартного раствора, ;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

m - масса анализируемого образца, г ();

Р - содержание Римсульфурона в аналитическом стандарте, %.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

, где (1)

, - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

, где

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг"*

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки должна удовлетворять условию:

, где

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

, где

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

, где

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры рассчитывают по формуле:

, где

, , - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг;

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры () с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

, (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

, где (3)

, - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

14. Разработчики

Калинин В.А., профессор, канд. с-х. наук, Довгилевич А.В., ст. н. сотр., канд. хим. наук, Довгилевич Е.В., ст. н. сотр., канд. биол. наук, Щербинкина Е.Н., инженер.

Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (499) 976-37-68, факс: (499) 976-43-26.

______________________________

* - 0,02 мг/кг - предел обнаружения.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко