Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 53641-2009 "Мясо и мясные продукты. Метод определения остаточной активности кислой фосфатазы, выраженной массовой долей фенола в колбасных изделиях из термически обработанных ингредиентов" (утв. приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 15 декабря 2009 г. N 992-ст) (отменен)

Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 53641-2009
"Мясо и мясные продукты. Метод определения остаточной активности кислой фосфатазы, выраженной массовой долей фенола в колбасных изделиях из термически обработанных ингредиентов"
(утв. приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 15 декабря 2009 г. N 992-ст)

Meat and meat products. Method for determination of residual activity of acid phosphatase, expressed by mass fraction of phenol in sausage products made from thermally treated ingredients

Дата введения 1 января 2011 г.

ГАРАНТ:

Приказом Росстандарта от 29 ноября 2012 г. N 1475-ст ГОСТ Р 53641-2009 отменен с 15 февраля 2015 г. в связи с введением в действие с 1 июля 2013 г. ГОСТ 31787-2012 "Мясо и мясные продукты. Метод определения остаточной активности кислой фосфатазы, выраженной массовой долей фенола, в колбасных изделиях из термически обработанных ингредиентов"

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясные продукты - вареные колбасные изделия из термически обработанных ингредиентов (ливерные колбасы и паштеты с использованием субпродуктов) и устанавливает фотометрический метод определения остаточной активности кислой фосфатазы.

Диапазон измерения массовой доли остаточной активности кислой фосфатазы от 0% до 0,012% фенола.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1-91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатуры видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3652-69 Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия

ГОСТ 4025-95 Мясорубки бытовые. Технические условия

ГОСТ 4109-79 Реактивы. Бром. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5789-78 Реактивы. Толуол. Технические условия

ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9792-73 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 10931-74 Реактивы. Натрий молибденовокислый 2-водный. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 18289-78 Реактивы. Натрий вольфрамовокислый 2-водный. Технические условия

ГОСТ 20469-95 Электромясорубки бытовые. Технические условия

ГОСТ 20469-95 Электромясорубки бытовые. Технические условия

ГОСТ 20903-75 Кюветы прямоугольные кварцевые для спектрофотометров. Основные размеры. Технические требования

ГОСТ 22280-76 Реактивы. Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия

ГОСТ 23519-93 Фенол синтетический технический. Технические условия

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

______________________________

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Сущность метода

Метод основан на фотометрическом измерении интенсивности окраски продукта, зависящей от величины остаточной активности кислой фосфатазы, выраженной массовой долей фенола, в процентах.

4 Отбор и подготовка проб

4.1 Отбор проб - по ГОСТ Р 51447, ГОСТ 9792.

4.2 Дополнительно анализируемую пробу освобождают от оболочки, измельчают, дважды пропуская через мясорубку, и тщательно перемешивают. Затем пробу помещают в стеклянную или пластмассовую емкость вместимостью 200-400 , заполняя ее полностью, и закрывают крышкой.

Пробу хранят при температуре ()°С до окончания испытаний.

5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы, материалы

Спектрофотометр, обеспечивающий измерение при длине волны () нм, или фотоэлектрический калориметр со светофильтром, имеющим максимум поглощения при длине волны () нм.

рН-метр лабораторный, позволяющий проводить измерения с допускаемой погрешностью единицы рН.

Кюветы стеклянные по ГОСТ 20903-75 с расстоянием между рабочими гранями 10 мм.

Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469 с отверстиями решетки диаметром от 3 до 4 мм.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания г.

Ультратермостат или водяная баня, обеспечивающие регулирование температуры от 30°С до 100°С.

Воронки В-36-80 ХС, В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 2-500-2,2-1000-2 по ГОСТ 1770, откалиброванные на наливной объем.

Холодильник ХШ-1-400-29/32 ХС по ГОСТ 25336.

Колба К-1-2000-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.

Пипетки 4-2-1, 4-2-2, 7-2-5, 7-2-10 по ГОСТ 29169.

Пробирки П1-16-150 ХС, П1-21-200 ХС, П1-25-200 ХС по ГОСТ 25336.

Палочки стеклянные.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Груша резиновая.

Кислота лимонная по ГОСТ 3652, х.ч.

Натрий лимоннокислый 5,5-водный по ГОСТ 22280, ч.д.а.

Фенилфосфорной кислоты динатриевая соль, ч, свежеприготовленный раствор массовой концентрации 2 .

Кислота трихлоруксусная кристаллическая, ч, растворы массовой концентрации 50 и 200 .

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч., раствор молярной концентрации 0,5 .

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Фенол по ГОСТ 23519 марки А.

Толуол по ГОСТ 5789, ч.д.а.

Натрий вольфрамовокислый 2-водный по ГОСТ 18289, х.ч.

Натрий молибденовокислый по ГОСТ 10931, ч.д.а.

Литий сернокислый 1-водный с массовой долей основного вещества не менее 97%.

Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552, х.ч., плотностью 1,72 .

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч., плотностью 1,19 .

Бром по ГОСТ 4109, х.ч.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, оборудования с техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.

6 Подготовка к испытанию

6.1 Приготовление цитратного буфера

В мерной колбе вместимостью 1000 в дистиллированной воде растворяют г лимоннокислого натрия и г лимонной кислоты, доливают дистиллированной водой до метки и перемешивают, рН буфера 6,5. Затем добавляют 1 толуола. Срок хранения раствора в холодильнике при температуре ()°С - не более 12 сут.

6.2 Приготовление реактива Фолина

100 г вольфрамовокислого натрия и 25 г молибденовокислого натрия растворяют в 700 дистиллированной воды. К раствору добавляют 50 ортофосфорной кислоты и 100 соляной кислоты. Смесь осторожно кипятят в течение 10 ч в колбе вместимостью 2000 с обратным холодильником, после чего охлаждают при комнатной температуре. Затем добавляют 150 г сернокислого лития, 50 дистиллированной воды и несколько капель брома. Остаток брома отгоняют кипячением смеси в вытяжном шкафу, охлаждают, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 , доводят объем дистиллированной водой до метки, перемешивают и фильтруют. Приготовленный реактив Фолина должен быть золотисто-желтого цвета без зеленого оттенка. Срок хранения реактива Фолина в склянке с притертой пробкой в темном месте - не более 6 мес.

Допускается применение готового реактива Фолина.*

6.3 Приготовление основного раствора

На лабораторных весах взвешивают 2,0 г фенола с записью результата до третьего знака после запятой, растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1000 , доводят объем до метки и перемешивают. Отбирают пипеткой с помощью резиновой груши 5 раствора в колбу вместимостью 500 , добавляют около 300 дистиллированной воды, вносят 25 г кристаллической трихлоруксусной кислоты. После растворения содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Полученный основной раствор содержит 20 мкг фенола в 1 .

6.4 Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика готовят три основных раствора.

6.4.1 Приготовление градуировочных растворов

Из каждого основного раствора готовят шесть градуировочных растворов. Для этого в соответствии с таблицей 1 в пробирки вместимостью 25 вносят основной раствор фенола и доводят объем в каждой пробирке до 2,5 , добавляя соответствующий объем раствора трихлоруксусной кислоты массовой концентрации 50 .

Таблица 1
Номер пробирки	Объем основного раствора,	Объем раствора трихлоруксусной кислоты массовой концентрации 50	Массовая концентрация фенола в стандартном растворе, мкг
N 1	0	2,5	0
N 2	0,25	2,25	5
N 3	0,5	2,0	10
N 4	1,0	1,5	20
N 5	1,5	1,0	30
N 6	2,0	0,5	40

6.4.2 В каждую пробирку добавляют 5 раствора гидроокиси натрия молярной концентрации 0,5 , перемешивают, выдерживают 10 мин, добавляют 1,5 реактива Фолина, разведенного дистиллированной водой в соотношении 1:2, и снова перемешивают.

Через 30 мин в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм измеряют оптическую плотность растворов по отношению к контрольному раствору (пробирка N 1) при длине волны () нм.

6.4.3 По полученным средним данным из трех основных растворов строят градуировочный график. Пример построения градуировочного графика для определения массовой доли фенола приведен в приложении А.

6.5 Приготовление испытуемого раствора

Из подготовленной к испытанию пробы берут две навески массой по 1 г (результат взвешивания записывают до третьего десятичного знака) и переносят в две пробирки - опытную и контрольную.

В пробирки вносят по 10 цитратного буфера рН 6,5, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и настаивают в течение 20 мин при комнатной температуре, периодически перемешивая.

В контрольную пробирку добавляют 5 раствора трихлоруксусной кислоты массовой концентрации 200 , перемешивают и добавляют 5 раствора динатриевой соли фенилфосфорной кислоты массовой концентрации 2 , выдерживают 10 мин и фильтруют.

В опытную пробирку добавляют 5 раствора динатриевой соли фенилфосфорной кислоты массовой концентрации 2 и помещают в ультратермостат при температуре ()°С на 1 ч, затем добавляют 5 раствора трихлоруксусной кислоты массовой концентрации 200 , выдерживают 10 мин и фильтруют.

7 Проведение измерений

7.1 Для проведения цветной реакции из контрольной и опытной пробирок отбирают по 2,5 без белкового фильтрата. Цветную реакцию проводят по 6.4.2.

7.2 По градуировочному графику определяют массовую долю фенола в пробирках.

8 Обработка результатов измерений

8.1 Массовую долю фенола, X, %, вычисляют по формуле

(1)

где С - масса фенола, найденная по градуировочному графику, соответствующая оптической плотности, найденной по разности плотностей в опытной и контрольной пробирках (), мкг;

20 - разведение навески, ;

m - масса анализируемой пробы, г;

2,5 - объем фильтрата, отобранный для цветной реакции, ;

- коэффициент пересчета в г;

- оптическая плотность раствора в опытной пробирке;

- оптическая плотность раствора в контрольной пробирке.

Вычисление проводят до четвертого знака после запятой.

8.2 За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение двух параллельных измерений, полученных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

, (2)

где и - результаты двух параллельных измерений, %;

г-значение предела повторяемости, %.

В случае, если абсолютное расхождение между результатами двух измерений превышает предел повторяемости (сходимости) r, проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, проводят в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6, п. 5.2.2. За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение повторных параллельных измерений, имеющих расхождение в допустимых пределах. Окончательный результат округляют до третьего десятичного знака.

8.3 Результаты измерения представляют в виде

при P=0,95, (3)

где - среднеарифметическое значение двух параллельных определений, признанных приемлемыми, %;

- граница абсолютной погрешности измерения при Р = 0,95.

9 Метрологические характеристики

9.1 Диапазон измерения

Диапазон измерения массовой доли остаточной активности кислой фосфатазы от 0% до 0,012% фенола.

9.2 Прецизионность метода

Показатели прецизионности метода определены в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-2.

9.2.1 Границы абсолютной погрешности результатов измерения, %, при доверительной вероятности Р=0,95 вычисляют по формуле

, (4)

где - среднеарифметическое значение двух параллельных измерений, признанных приемлемыми, %.

9.2.2 Предел повторяемости r, %, при доверительной вероятности Р=0,95 вычисляют по формуле

. (5)

Расхождение между результатами двух измерений, полученными на идентичной испытуемой пробе, одним оператором, с использованием одного и того же оборудования в пределах кратчайшего из возможных интервалов времени, будет превышать предел повторяемости r в среднем не более одного раза из двадцати случаев при правильном использовании метода.

9.2.3 Абсолютное расхождение между результатами двух единичных измерений, полученными одним и тем же методом на идентичной испытуемой пробе, в разных лабораториях, разными операторами, с использованием разного оборудования, будут различаться с превышением предела воспроизводимости R, %, в среднем не более одного раза из двадцати случаев, который вычисляют по формуле

, (6)

где - среднее арифметическое значение результатов двух измерений, %.

10 Требования безопасности

10.1 При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

10.2 Помещение, в котором проводятся измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

10.3 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.

_____________________________

* 1,2-Naphthoquinone-4-sulfonic acid sodium salt, фирма "Fluka", номер по каталогу - 47641.