Методические указания МУК 4.1.2866-11 "Определение остаточных количеств Хлорантранилипрола в плодовых (косточковых) культурах, перце, огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 31 марта 2011 г.)

Методические указания МУК 4.1.2866-11
"Определение остаточных количеств Хлорантранилипрола в плодовых (косточковых) культурах, перце, огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 31 марта 2011 г.)

Дата введения: с момента утверждения

Общие положении и область применения

Свидетельство об аттестации методики от 28.09.2010 N 0050.27.09.10.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций Хлорантранилипрола в плодовых косточковых культурах, перце, огурцах, томатах, ягодах винограда и виноградном соке в диапазоне 0,01-0,1 мг/кг.

Хлорантранилипрол

Структурная формула:

"Структурная формула хлорантранилипрола"

Название действующего вещества по ИЮПАК: 3-Бром-N-[4-хлop-2-метил-6-(метилкарбамоил)фенил]-1-(3-хлорпиридин-2-ил)- 1Н-пиразол-5-карбоксамид.

Эмпирическая формула:

Молекулярная масса: 483,15

Порошок белого цвета без запаха. Температура плавления 208-210 °С. Давление паров Па при ; Па при 25°С. Растворимость в органических растворителях при 20°С (в ): ацетон - 3,446; ацетонитрил - 0,711; диметилформамид - 124; дихлорметан - 2,476; этилацетат - 1,144; метанол - 1,714; толуол - 0,32; н-октанол - 0,386; н-гексан < 0,0001. Растворимость в воде при 20 °С (в ): 0,972 (рН 4), 0,880 (рН 7), 0,971 (рН 9). Коэффициент распределения н-октанол/вода 2,76.

Краткая токсикологическая характеристика: Острая пероральная токсичность для крыс и мышей - более 5 000 ; острая дермальная токсичность для крыс - более 5 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность для крыс - более 5,1  (4 ч).

Область применения: Хлорантранилипрол - инсектицид широкого спектра действия класса антранилдиамидов, эффективно подавляет развитие вредителей из отряда чешуекрылых, жесткокрылых (колорадский жук), двукрылых (минеры).

МДУ хлорантранилипрола (в импортируемой продукции) в винограде, перце, плодовых (косточковых) - 1,0 мг/кг, томатах - 0,3 мг/кг, огурцах - 0,2 мг/кг.

1. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ей составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р=0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n= 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель точности (граница относительной погрешности), , % Р=0,95	Стандартное отклонение повторяемости, , %	Предел повторяемости, r, %	Предел воспроизводимости, R, %
Плодовые (косточковые) культуры	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	3,6	10	12
Перец	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	3,9	11	13
Огурцы	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	3,4	10	12
Томаты	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	3,6	10	12
Ягоды винограда	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	2,9	8	10
Виноградный сок	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	2,6	7	8

Таблица 2

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р=0,95, n=20
	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Полнота извлечения вещества, %	Стандартное отклонение, S, %	Доверительный интервал среднего результата, , %
Плодовые (косточковые) культуры	0,01	0,01 - 0,1	87,47	2,9	1,5
Перец	0,01	0,01 - 0,1	84,45	3,6	1,9
Огурцы	0,01	0,01 - 0,1	90,70	3,2	1,7
Томаты	0,01	0,01 - 0,1	87,29	3,0	1,6
Ягоды винограда	0,01	0,01 - 0,1	87,09	3,6	1,9
Виноградный сок	0,01	0,01 - 0,1	91,33	2,7	1,4

2. Метод измерений

Метод основан на определении Хлорантранилипрола с использованием обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после извлечения вещества из анализируемых образцов ацетонитрилом, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с флорисилом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны фирмы "Agilent"	Номер Госреестра 16193-06
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104-2001
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности  г	ГОСТ 24104-2001
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-500-2, 2-1 000-2	ГОСТ 1770-74
Меры массы	ГОСТ 7328-2001
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10	ГОСТ 29227-91
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5 и 10	ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100, 250, 500 и 1 000	ГОСТ 1770-74

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Хлорантранилипрол, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99,7% (CAS No. 563-12-2)
Ацетонитрил для хроматографии, хч	ТУ 6-09-14-2167-84
Вода для лабораторного анализа (деионизованная, бидистилированная)	ГОСТ Р 52501-2005
н-Гексан (гексан), для ВЭЖХ	ТУ 6-09-06-657-84
Калий марганцово-кислый (перманганат калия), хч	ГОСТ 20490-75
Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч, прокаленный	ГОСТ 4221-76
Кальций хлористый (хлорид кальция), хч, насыщенный водный раствор	ГОСТ 450-77
Кислота ортофосфорная, хч, 85%	ГОСТ 6552-80
Кислота серная концентрированная, хч	ГОСТ 4204-77
Метилен хлористый (дихлорметан), хч	ГОСТ 12794-80
Натрий сернокислый (сульфат натрия) безводный, хч	ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый (карбонат натрия), хч	ГОСТ 83-79
Натрий хлористый, хч, насыщенный водный раствор	ГОСТ 4233-77
Флорисил, для колоночной хроматографии (60-100 меш) фирм "SERVA", "MERK" (Германия) или аналогичный
Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фофора)	ТУ 6-09-4173-85
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), хч	ГОСТ 22300-76

Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих выполнения п. 7.1 (очистка растворителей).

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с Баня ультразвуковая фирмы "Донау" (Швейцария)	ТУ 64-1-2851-78
Бумажные фильтры "красная лента", обеззоленные или фильтры из хроматографической бумаги Ватман 3ММ	ТУ 2642-001-05015242-07
Воронка Бюхнера	ГОСТ 9147-80
Воронка делительная вместимостью 250 и 1 000	ГОСТ 9737-93
Воронки стеклянные конусные типа В-36-80 ХС и В-56-80 ХС	ГОСТ 25336-82
Гомогенизатор
Груша резиновая	ТУ9398-05-0576-9082-2003
Колба Бунзена	ГОСТ 25336-82
Колбы конические (плоскодонные) вместимостью 100, 250, 300	ГОСТ 23932-90
Колбы круглодонные на шлифе (для упаривания) вместимостью 10, 150 и 500	ГОСТ 9737-93
Колонка стеклянная для препаративной хроматографии, длиной 25 см, внутренним диаметром 10-12 мм
Мембранные фильтры микропористые, марки ММК, капроновые, диаметром 50 мм, размер пор 0,45 мкм	ТУ 9471-002-10471723-2003
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Насос водоструйный вакуумный	ГОСТ 25336-82
Стаканы химические, вместимостью 100, 500	ГОСТ 25336-82
Стекловата
Стеклянные палочки
Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30
Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы "Buchi", Швейцария
Установка для перегонки растворителей
Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Eclipse XDB С18, зернение 5 мкм
Центрифуга роторная, скорость вращения до 3 500 об./мин, с центрифужными стаканами объемом 100
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50-100

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоивших данную методику и подтвердивших экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха °С и относительной влажности не более 80%.

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, раствора внесения, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, приготовление смесей растворителей для очистки экстрактов на колонке, подготовка колонки с флорисилом, проверка хроматографического поведения хлорантранилипрола на ней.

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.1. Ацетонитрил

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1  ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1  ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.1.2. н-Гексан

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.3. Хлористый метилен и этилацетат

7.1.3.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску  г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 , растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

7.1.3.2. Очистка растворителей. Каждый растворитель промывают последовательно 5%-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

7.2.1. Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с массовой долей 0,2% (0,2%-й раствор). В мерную колбу вместимостью 500  помещают 250-300  бидистиллированной воды, вносят 1  ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.

7.2.2. Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1 000  помещают 500  ацетонитрила, вносят 500  0,2%-го раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 0,8  до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировочных растворов

7.4.1. Исходный раствор Хлорантранилипрола для градуировки (концентрация
100 ). В мерную колбу вместимостью 100  помещают 0,01 г Хлорантранилипрола, растворяют в 50-70  ацетонитрила, доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

Градуировочные растворы N 2-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.4.2. Раствор N 1 Хлорантранилипрола для градуировки и внесения (концентрация 10 ). В мерную колбу вместимостью 100  помещают 10,0  исходного раствора Хлорантранилипрола с концентрацией 100  (п. 7.4.1), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике не более месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".

7.4.3. Рабочие растворы N 2-5 Хлорантранилипрола для градуировки (концентрация 0,1 - 1,0 ).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 помещают по 1,0, 2,0, 5,0 и 10  раствора N 1 Хлорантранилипрола с концентрацией 10  (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2-5 с концентрацией Хлорантранилипрола 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0  соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике не более недели.

7.5. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площадей пиков (мЕА с) от концентрации Хлорантранилипрола в растворе (), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки N 2-5.

В инжектор хроматографа вводят 20  каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.

Градуировочную характеристику проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значение площади отличается более, чем на 12% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

7.6. Приготовление смесей гексан-этилацетат для очистки экстрактов на колонке с флорисилом

7.6.1. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 9:1). В мерную колбу вместимостью 100  помещают 90  гексана и 10  этилацетата, перемешивают.

7.6.2. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 8:2). В мерную колбу вместимостью 100  помешают 80  гексана и 20  этилацетата, перемешивают.

7.6.3. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 7:3). В мерную колбу вместимостью 100  помещают 70  гексана и 30 3 этилацетата, перемешивают.

7.7. Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстрактов

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 10-12 мм, уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г флорисила в 30  гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента, на который помещают слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают смесью гексан-этилацетат в объемном соотношении 7:3, затем гексаном, порциями по 30 , скорость прохождения растворителя 1-2 капли в секунду. Колонка готова к работе.

7.8. Проверка хроматографического поведения Хлорантранилипрола на колонке с флорисилом

В круглодонную колбу вместимостью 10  помещают 0,5  раствора N 1 Хлорантранилипрола с концентрацией 10  (п. 7.4.2), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35°С. Сухой остаток растворяют в 3  смеси гексан-этилацетат (9 : 1, по объему), помещая на ультразвуковую баню на 40-60 с, и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Колбу обмывают дважды этой же смесью растворителей, порциями по 3 , которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку - 1-2 капли в секунду. Промывают колонку 50  гексана, смесями гексан-этилацетат в объемном соотношении 9:1, затем 8 :2 порциями по 30 , элюат отбрасывают.

Затем колонку промывают 50  смеси гексан-этилацетат (7 : 3, по объему) со скоростью 1-2 капли в секунду. Фракционно (по 10 ) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 2  подвижной фазы для ВЭЖХ, анализируют содержание Хлорантранилипрола по п. 9.3.

Фракции, содержащие хлорантранилипрол, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание: Проверку хроматографического поведения Хлорантранилипрола следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТами: 21920-76 "Слива и алыча крупноплодная свежие, ТУ"; 21833-76 "Персики свежие. ТУ"; 21921-76 "Вишня свежая. ТУ"; 21922-76 "Черешня свежая. ТУ"; 21832-76 "Абрикосы свежие. ТУ"; 21405-75 "Алыча мелкоплодная свежая. ТУ"; 1725-85 "Томаты свежие, ТУ"; Р 51810-2001 "Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети. ТУ"; 1726-85 "Огурцы свежие. ТУ"; 13908-68 "Перец сладкий свежий. ТУ"; 25896-83 "Виноград свежий столовый, ТУ", 28472-90 "Виноград свежий ручной уборки для консервирования. Требования при заготовках и поставках"; 26313-84 "Продукты переработки плодов и овощей"; "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (от 21.08.1979 N 2051-1979).

Отобранные пробы плодов косточковых культур, огурцов, томатов, перца, винограда, сока хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 5 дней. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре - 18°С.

Перед анализом образцы плодов косточковых культур, огурцов, томатов, перца, ягод винограда измельчают с помощью гомогенизатора.

9. Выполнение определения

9.1. Плодовые косточковые культуры, огурцы, томаты, перец, ягоды винограда

9.1.1. Экстракция

Образец измельченных с помощью гомогенизатора плодов косточковых культур, огурцов, томатов, перца, ягод винограда массой 20 г помешают в плоскодонную колбу вместимостью 250-300 , вносят 20  бидистиллированной воды, помещают на аппарат для встряхивания на 20 мин. Добавляют 80  ацетонитрила, интенсивно встряхивают (или гомогенизируют) в течение 1 мин, затем помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин.

Пробам дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр "красная лента". Растительный остаток повторно экстрагируют 100  ацетонитрила при встряхивании в течение 30 мин, раствор фильтруют на воронке Бюхнера. Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в колбу для упаривания на 500  и упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°С до объема 10-15 . Очищают перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 9.1.2, затем на колонке с флорисилом по п. 9.1.3.

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Водный остаток в колбе, полученный по п.п. 9.1.1 или 9.2.1, переносят в делительную воронку вместимостью 250 , колбу дополнительно обмывают 40  воды, которую также переносят в воронку, вносят 20  насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают. Затем в воронку вносят 30  дихлорметана, интенсивно встряхивают в течение 1 мин, после полного разделения фаз нижний дихлорметановый слой переносят в коническую колбу на 250-300 . Экстракцию Хлорантранилипрола повторяют еще дважды порциями дихлорметана объемом 30, затем 20 . Для обеспечение лучшего расслаивания проб, раствор переносят в центрифужный стакан и центрифугируют 5 мин при 3 000 об/мин. Объединенный дихлорметановый экстракт фильтруют через слой (около 2 см) безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в химическую воронку, в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 150 , упаривают досуха и дополнительно очищают на колонке с флорисилом по п. 9.1.3.

9.1.3. Очистка экстракта на колонке с флорисилом

Остаток, полученный по п. 9.1.2, находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 3  смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему), помещая на ультразвуковую баню на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Колбу обмывают дважды смесью гексан-этилацетат (9:1, по объему) порциями по 3 , которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку - 1-2 капли в секунду. Промывают колонку 50  гексана, 30  смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 9:1, затем 30  смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 8:2, элюат отбрасывают.

Хлорантранилипрол элюируют с колонки 40  смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 7:3 со скоростью 1-2 капли в секунду, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 150 , раствор упаривают досуха при температуре не выше 35°С, остаток растворяют в 2  подвижной фазы и анализируют на содержание Хлорантранилипрола по п. 9.3.

9.2. Виноградный сок

9.2.1. Экстракция

Пробу сока массой 20 г помещают в коническую колбу на 250-300 , добавляют 20  насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают, вносят 80  бидистиллированной воды, интенсивно встряхивают (или гомогенизируют) в течение 1 мин, затем помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин.

Пробу переносят в делительную воронку на 250 , после полного разделения слоев, нижний водный слой собирают в колбу, в которой находилась проба, верхний переносят в колбу для упаривания на 500 , фильтруя через бумажный фильтр, помещенный в химическую воронку. В коническую колбу с пробой вносят новую порцию ацетонитрила объемом 100  и повторно экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Затем раствор переносят в делительную воронку на 250 , после полного разделения слоев, нижний водный слой отбрасывают, верхний фильтруют через бумажный фильтр, помещенный в химическую воронку, и переносят в колбу для упаривания, объединяя с первой порцией экстракта.

Объединенный отфильтрованный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°С до объема 10-15 . Очищают, перераспределением в системе несмешиваюшихся растворителей по п. 9.1.2, затем на колонке с флорисилом по п. 9.1.3.

9.3. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны.

Рабочие длины волн: 260 и 245 нм*.

Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Eclipse XDB С18, зернение 5 мкм. Температура колонки: 25°С.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,2% ортофосфорная кислота (50:50, по объему).

Скорость потока элюента: 0,8 .

Объем вводимой пробы: 20 .

Ориентировочное время выхода Хлорантранилипрола: 6,97 - 7,15 мин.

Линейный диапазон детектирования 2 - 20 нг.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площади пиков вещества (в мЕА*с), находят среднее значение, с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию Хлорантранилипрола в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 , разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, не более, чем в 50 раз.

10. Обработка результатов анализа

Содержание Хлорантранилипрола в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

, где

С - концентрация Хлорантранилипрола, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хромато-графического пика, ;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

m - масса анализируемого образца, г.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

, где (1)

- результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

 мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

, где

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание хлорантранилипрола в пробе менее 0,01 мг/кг"*,

* - 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецинзионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой), мг/кг; при этом:

, где

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

, где

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном определяемых концентраций, табл. 1), %.

Контрольный параметр процедуры рассчитывают по формуле:

, где

- среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

, (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

, где (3)

- результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном определяемых концентраций, табл. 1), %.

14. Разработчики

Ракитский В.Н., Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора).

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

______________________________

* Хроматографирование пробы при двух длинах волн повышает надежность идентификации.