Методические указания МУК 4.1.3828-22 "Многокомпонентное определение действующих веществ пестицидов и их метаболитов в пищевой продукции и продовольственном (пищевом) сырье растительного происхождения. Методы пробоподготовки" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 23 декабря 2022 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.3828-22
"Многокомпонентное определение действующих веществ пестицидов и их метаболитов в пищевой продукции и продовольственном (пищевом) сырье растительного происхождения. Методы пробоподготовки"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 23 декабря 2022 г.)

Введены впервые

I. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения методов пробоподготовки пищевых продуктов и продовольственного (пищевого) сырья растительного происхождения для последующего качественного и количественного определения остаточных количеств пестицидов и их метаболитов хроматографическими методами с масс-спектрометрическим детектированием.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного (пищевого) сырья и пищевой продукции, а также могут быть использованы организациями, аккредитованными в установленном порядке на проведение исследований продовольственного (пищевого) сырья, пищевой продукции.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

II. Сущность метода

2.1. В основу МУК положены процедуры подготовки пищевых продуктов и продовольственного (пищевого) сырья растительного происхождения, основанные на международных методиках QuEChERS (англ. Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, and Safe - быстро, просто, дешево, эффективно, надежно и безопасно) и QuPPe Method (англ. Quick Polar Pesticides Method - быстрый метод анализа полярных пестицидов).

В МУК рассмотрены основные методы пробоподготовки пищевой продукции и продовольственного сырья растительного происхождения с учетом принадлежности объекта испытаний к определенной группе продуктов для многокомпонентного определения остаточных количеств пестицидов, относящихся к различным химическим классам. Основными этапами пробоподготовки являются предварительная подготовка проб к анализу, экстракция исследуемых компонентов, очистка экстрактов, стабилизация исследуемых компонентов в экстракте.

2.2. Предварительная подготовка проб к анализу. Выбор аналитической репрезентативной части испытуемой пробы, измельчение (гомогенизацию) проводят в зависимости от принадлежности объекта испытаний к определенной группе продукции.

2.3. Экстракция исследуемых компонентов.

2.3.1. Экстракция без гидролиза. Экстракцию из измельченных анализируемых проб растительной продукции выполняют ацетонитрилом с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния, хлорида натрия, буферных солей лимонной кислоты).

2.3.2. Экстракция с гидролизом. Экстракцию из измельченных анализируемых проб растительной продукции выполняют ацетонитрилом с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния, хлорида натрия, буферных солей лимонной кислоты) после щелочного гидролиза конъюгатов и эфиров веществ (2,4-D, 2,4-DB, клопиралида, дихлорпропа-П, флуазифопа-П, флуроксипира, галоксифопа, МСРА/МСРВ и других) с помощью раствора гидроксида натрия, его последующей нейтрализации серной кислотой.

2.3.3. Экстракция высокополярных пестицидов. Экстракцию из измельченных анализируемых проб растительной продукции выполняют 1 %-м раствором муравьиной кислоты в метаноле.

2.4. Очистка экстракта. Очистка экстракта (при необходимости) проводится несколькими способами: вымораживание экстракта путем выдержки его в течение нескольких часов при низких температурах, а также очистка с использованием метода дисперсионной твердофазной экстракции. Очистку экстрактов методом дисперсионной твердофазной экстракции проводят с применением сорбента на основе первичных и вторичных аминов, а также с использованием смесей с добавлением октадецилсилана и/или графитизированной сажи.

2.5. Разбавление экстракта. Разбавление экстракта позволяет снизить эффект матрицы. Поскольку при разбавлении экстракта имеет место преднамеренное снижение концентрации аналитов, процедура приемлема при аналитических возможностях измерительного оборудования.

2.6. Стабилизация исследуемых компонентов в экстракте. Исследуемые компоненты в экстракте при необходимости стабилизируют раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле.

III. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы

3.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 3.1 - 3.3.

Таблица 3.1

Средства измерений

Наименование средств измерения	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
1	2
Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха	Внесено в реестр "Утвержденные типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Весы лабораторные аналитические	С пределом допустимой погрешности не более 0,0005 г по ГОСТ Р 53228
Весы лабораторные	С пределом допустимой погрешности не более 0,01 г по ГОСТ Р 53228
Колбы мерные	2 - (10, 50, 100, 1000) - 2 по ГОСТ 1770 или пластиковые мерные колбы
Меры массы	ГОСТ OIML R 111-1
Пипетки градуированные	1-1-2-1; 1-1-2-2; 1-1-2-5; 1-1-2-10 по ГОСТ 29227
Термометр лабораторный	Диапазон измерения температур от 0 °C до плюс 55 °C, цена деления шкалы не менее 0,1 °C
Цилиндры мерные	2-10-2, 2-500-2 по ГОСТ 1770
Дозаторы лабораторные одноканальные механические	Диапазон измерений 10 - 100, 100 - 1000, 500 - 5000 мм 3, 1000 - 10000 мм 3. Внесены в Реестр "Утвержденные типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Таблица 3.2

Реактивы

Наименование реактивов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
1	2
Аналитические стандартные образцы действующих веществ пестицидов	Содержание основного вещества не менее 95 %
Азот особой чистоты сорт 1 в баллонах	Чистота не менее 99,999 %
Аргон газообразный высокой чистоты в баллонах	Чистота не менее 99,996
Ацетат аммония	ГОСТ 3117, химически чистый
Ацетонитрил для ВЭЖХ	Чистота не менее 99,9 %
Ацетон особо чистый	ГОСТ 2603
Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизированная)	ГОСТ Р 52501
н-Гексан	Химически чистый
Гелий газообразный высокой чистоты в баллонах	Марка "6", высокой чистоты, с содержанием гелия не менее 99,9999 %
Двуокись углерода твердая (сухой лед), высший сорт	ГОСТ 12162, гранулированная
Индикаторная бумага универсальная	Диапазон измерения pH 0 - 12
Метиловый спирт (метанол)	ГОСТ 6995, химически чистый
Муравьиная кислота	99,7 %-я чистая для анализа по ГОСТ 5848
Магний сернокислый (сульфат магния)	Безводный, химически чистый
Натрия гидроксид	ГОСТ 4328, химически чистый
Натрий хлористый (хлорид натрия)	ГОСТ 4233, химически чистый
Натрий лимоннокислый двузамещенный	1,5-водный, химически чистый
Натрий лимоннокислый трехзамещенный (цитрат натрия)	2-водный, химически чистый
Серная кислота	ГОСТ 4204, химически чистая
Сорбент для твердофазной экстракции на основе первичных и вторичных аминов	Площадь поверхности 570 м 2/г, средний размер пор 67 А, средний размер частиц 60 мкм
Сорбент для твердофазной экстракции на основе силикагеля с привитыми октадецильными группами (С18)	Площадь поверхности 547 м 2/г, средний размер пор 64 А, средний размер частиц 58 мкм
Сорбент для очистки на основе графитизированной сажи	Площадь поверхности сорбента 100 м 2/г, размер частиц 100 - 400 меш
Толуол	Химический чистый для хроматографии
Этилацетат (этиловый эфир уксусной кислоты)	ГОСТ 8981, химически чистый
Спирт этиловый (этанол) ректификованный	ГОСТ 22300
Формиат аммония	Химически чистый
Уксусная кислота ледяная	ГОСТ 61, химически чистая

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки.

Таблица 3.3

Вспомогательное оборудование, устройства, материалы

Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
1	2
Аппарат для встряхивания проб (шейкер орбитальный)	Орбита до 10 мм, скорость оборотов до 300 об/мин
Баня ультразвуковая	Рабочая частота 35 кГц
Воронки лабораторные	В-36-50 ХС по ГОСТ 25336
Виалы с фторопластовой прокладкой и навинчивающейся крышкой	Вместимостью 1,5 - 2 см 3
Вставки для виал	Вместимостью 150 - 400 мм 3, стеклянные или полипропиленовые
Груша резиновая	-
Емкость из темного стекла с крышкой	Вместимостью 100 - 250 см 3
Колба стеклянная плоскодонная с взаимозаменяемым конусом, с пробкой	П-1-(50-500)-29/32 ТС, ГОСТ 25336
Флаконы из стекла или пластика с завинчивающейся крышкой с фторопластовой прокладкой	Вместимостью 10 - 20 см 3
Емкость из пластика с крышкой	Вместимостью 200 - 300 см 3
Керамические гомогенизаторы для пробирок на 50 см 3	-
Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками	Вместимостью 50 и 15 см 3
Мельница лабораторная (измельчитель куттер)	-
Мельница дисковая для размола зерна	-
Морозильная камера или морозильный ларь	Поддерживающие температуру не выше минус 18 °C
Стаканы	В-1-100 ТС, В-1-400 ТС по ГОСТ 25336
Термостат суховоздушный	Поддерживающий температуру плюс 40 °C
Упариватель-концентратор	-
Фильтры мембранные для фильтрации проб с помощью шприца	Мембрана поливинилиденфторид, политетрафторэтилен, восстановленная целлюлоза, размер пор не более 0,45 мкм
Холодильник	Поддерживающий температуру от плюс 2 °C до плюс 6 °C
Центрифуга лабораторная роторная	Скорость вращения не менее 4500 об/мин
Шейкер вихревой (типа вортекс)	Скорость оборотов не менее 1500 об/мин
Шприцы	Инъекционные однократного применения вместимостью 2 - 5 см 3, ГОСТ ISO 7886-1

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

IV. Требования безопасности

4.1. При выполнении работ необходимо соблюдать технику безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на используемое оборудование.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см ²), необходимо соблюдать правила ¹. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

------------------------------

¹_{Приказ Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536 "Об утверждении федеральных норм и правил в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением" (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).}

------------------------------

4.4. Выполнение работ (пробоподготовку) в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы в химической лаборатории, освоивший данную методику и ознакомленный с правилами техники безопасности.

V. Условия проведения работ

5.1. При выполнении пробоподготовки соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 - 30 °C и относительной влажности не более 80 %.

VI. Подготовка к выполнению измерений

6.1. Измерениям предшествуют следующие операции: приготовление растворов, смеси солей для экстракции и смеси солей и сорбентов для очистки экстрактов, подготовка проб к анализу.

6.2. Приготовление 5 М (моль/дм ³) раствора гидроксида натрия в воде.

В мерную колбу вместимостью 100 см ³ помещают 50 - 60 см ³ деионизированной воды, вносят (200,1) г гидроксида натрия, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают.

Примечание. Осторожно, возможен сильный нагрев колбы.

Раствор хранят в плотно закрытой пластиковой посуде не более 30 дней.

6.3. Приготовление 2,5 М (моль/дм ³) раствора серной кислоты в воде.

В мерную колбу вместимостью 100 см ³ помещают 50 - 60 см ³ деионизированной воды, вносят (140,1) см ³ серной кислоты, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают.

Примечание. Осторожно, возможен сильный нагрев колбы.

Раствор хранят в плотно закрытой посуде не более 30 дней.

6.4. Приготовление 5 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле.

В мерную колбу вместимостью 100 см ³ помещают 50 - 60 см ³ ацетонитрила, вносят 5 см ³ муравьиной кислоты, доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают.

Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

6.5. Приготовление раствора муравьиной кислоты в метаноле с объемной долей 1 % (1 %-й раствор) для экстракции высокополярных пестицидов методом QuPPe.

В мерную колбу вместимостью 1000 см ³ помещают 300 - 400 см ³ метанола, вносят 10 см ³ муравьиной кислоты, перемешивают, доводят метанолом до метки, вновь перемешивают.

Раствор хранят в плотно закрытой посуде не более 30 дней.

6.6. Приготовление смеси солей для экстракции.

Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4,000,01) г магния сернокислого безводного, (1,000,01) г натрия хлористого, (1,00+0,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного 2-водного и (0,500,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного 1,5-водного. До использования хранят в герметичной упаковке не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование коммерческих наборов солей для экстракции проб растительного происхождения.

6.7. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов.

6.7.1. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов на основе первичных и вторичных аминов (PSA 150).

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см ³ помещают (1504) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичных и вторичных аминов, (9004) мг магния сернокислого, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование коммерческих дисперсионных наборов для обычных фруктов и овощей массой 10 г.

6.7.2. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов на основе первичных и вторичных аминов (двукратное увеличение содержания, PSA 300).

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см ³ помещают (3004) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичных и вторичных аминов, (900+4) мг магния сернокислого, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование коммерческих дисперсионных наборов для анализа фруктов и овощей с добавлением в него (1504) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичных и вторичных аминов.

6.7.3. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов на основе первичных и вторичных аминов (трехкратное увеличение содержания, PSA 450).

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см ³ помещают (4504) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичных и вторичных аминов, (9004) мг магния сернокислого, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование коммерческих дисперсионных наборов для анализа фруктов и овощей, с добавлением в него (3004) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичных и вторичных аминов.

6.7.4. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов, содержащих воск и масло (PSA 150 + С18).

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см ³ помещают (1504) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичных и вторичных аминов, (900+4) мг магния сернокислого и (1504) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование коммерческих дисперсионных наборов для анализа растительной продукции с маслами и воском.

6.7.5. Приготовление смеси сорбентов для очистки пигментированных экстрактов (PSA 150 + GCB 15).

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см ³ помещают (1504 мг) сорбента для твердофазной экстракции на основе первичных и вторичных аминов, (154) мг графитизированной сажи и (9004) мг магния сернокислого, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование коммерческих дисперсионных наборов для анализа пигментированных фруктов и овощей.

6.7.6. Приготовление смеси сорбентов для очистки сильно пигментированных экстрактов (PSA 150 + GCB 45).

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см ³ помещают (1504) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичных и вторичных аминов, (454) мг графитизированной сажи и (9004) мг магния сернокислого, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование коммерческих дисперсионных наборов для анализа сильно пигментированных фруктов и овощей.

6.8. Приготовление градуировочных растворов.

6.8.1. Приготовление основных растворов действующих веществ пестицидов (метаболитов).

Готовят индивидуальные основные растворы аналитических стандартов действующих веществ (метаболитов) пестицидов со значениями концентраций, достаточными для получения рабочих растворов смесей пестицидов, используемых при приготовлении градуировочных растворов (на растворителе или матрице).

Основные растворы готовят путем растворения веществ в мерных колбах ацетонитрилом. В зависимости от химической природы веществ возможно приготовление основных растворов на других растворителях (например, исходный раствор карбендазима готовят в этаноле, исходные растворы производных карбоновых кислот, таких как 2,4-Д, дикамба, клопиралид и другие, готовят в метаноле).

Примечание. Примеры приготовления основных и рабочих растворов для градуировки и внесения отдельных действующих веществ и метаболитов высокополярных пестицидов, вспомогательных компонентов приведены в приложении 1 к настоящим МУК.

Основные растворы хранят при температуре не выше минус 18 °C в герметичной таре. Если в составе растворителей присутствует вода, растворы хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C. В процессе хранения стабильность основных растворов регулярно контролируют.

6.8.2. Приготовление исходных растворов смесей действующих веществ (метаболитов) пестицидов (растворы для внесения и приготовления градуировочных растворов).

Исходные растворы смесей действующих веществ (метаболитов) пестицидов готовят путем смешивания определенных объемов соответствующих основных растворов (п. 6.8.1) и разбавления их ацетонитрилом или метанолом (для высокополярных пестицидов).

Исходные растворы обычно хранят при температуре не выше минус 18 °C в герметичной таре. Если в составе растворителей присутствует вода, растворы хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C. В процессе хранения стабильность действующих веществ (метаболитов) пестицидов, содержащихся в данных растворах, регулярно контролируют.

Концентрация пестицидов в исходных растворах должна быть достаточной для приготовления соответствующих градуировочных растворов действующих веществ (метаболитов) пестицидов на основе растворителя или матрицы при разбавлении экстракта холостой пробы.

Примечание. В связи с низкой устойчивостью к изменению уровня pH, присущей некоторым пестицидам, для охвата всего рассматриваемого спектра веществ может потребоваться приготовление нескольких рабочих растворов, содержащих смесь компонентов, относящихся к определенным группам пестицидов.

6.8.3. Приготовление градуировочных растворов смесей действующих веществ (метаболитов) пестицидов на растворителе.

Градуировочные растворы смесей действующих веществ (метаболитов) пестицидов на растворителе готовят разбавлением точных объемов исходных растворов (п. 6.8.2) подходящим растворителем (ацетонитрил, этилацетат и другие, а также смеси растворителей).

Готовится несколько градуировочных растворов, охватывающих диапазон концентраций, который позволяет построить соответствующую калибровочную кривую для каждого определяемого вещества.

6.8.4. Приготовление градуировочных растворов для построения калибровки, согласованной с матрицей (матричная калибровка).

При выявлении изменений (усиления/ослабления) хроматографического сигнала аналита в экстракте образца более чем на 20 % от величины сигнала в растворителе рекомендуется применение матричной калибровки. Сущность матричной калибровки заключается в компенсации эффектов матриц за счет использования экстракта аналогичного или близкого (репрезентативного) холостого образца, относящегося к одной категории продуктов, вместо органического растворителя.

Примечание. Категории продуктов и репрезентативные продукты представлены в приложении 4 к настоящим МУК.

6.8.4.1. Приготовление экстракта холостого образца для приготовления матричной калибровки и разведения. При приготовлении экстракта холостого образца для матричной калибровки и разведения от образца, не содержащего исследуемые компоненты, отбирают несколько навесок и проводят пробоподготовку в соответствии с видом продукции. Получают объединенный очищенный экстракт общим объемом не менее 10 см ³. Экстракт переносят во флаконы на 10 - 20 см ³ с фторопластовой прокладкой и завинчивающейся крышкой и используют для приготовления матричных растворов для градуировки и разведения проб. Экстракт хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 3 месяцев.

При отсутствии холостого образца допускается использование рабочих проб, прошедших проверку на содержание исследуемых компонентов. С этой целью из одной рабочей пробы отбирают две навески. В одну навеску вносят раствор, содержащий исследуемые вещества, из расчета получения экстракта с концентрацией аналитов на нижнем градуировочном уровне. Проводят пробоподготовку обеих навесок и анализируют в идентичных условиях. Если измеренная величина сигнала исследуемых веществ в условно холостом экстракте не превышает 30 % от величины сигнала в экстракте пробы с внесением на нижнем градуировочном уровне, то рабочая проба может использоваться в качестве холостого образца.

Для построения матричной калибровки применяют три способа приготовления градуировочных растворов.

6.8.4.2. Способ N 1. Градуировочные растворы, согласованные с матрицей, готовят тем же способом, что и градуировочные растворы на растворителе, используя вместо растворителя экстракт холостой пробы, полученный по п. 6.8.4.1. При подготовке градуировочных растворов на матрице следует учитывать, что объем добавленного растворителя в матричный экстракт не должен превышать 20 % от общего объема градуировочного раствора.

6.8.4.3. Способ N 2. Для приготовления основного матричного градуировочного раствора в навеску холостого образца вносят раствор с содержанием исследуемых компонентов на высшем градуировочном уровне. Проводят пробоподготовку в соответствии с видом продукции. Получают от 3 до 6 см ³ экстракта с соответствующей концентрацией каждого вещества на высшем градуировочном уровне. Рабочие растворы для построения матричной калибровки готовят методом последовательного разбавления в виалах объемом 1,5 - 2,0 см ³. При помощи дозатора в виалы помещают необходимые объемы основного матричного градуировочного раствора и экстракта холостой пробы, приготовленного по п. 6.8.4.1.

6.8.4.4. Способ N 3. Для приготовления рабочих матричных градуировочных растворов отбирают несколько навесок холостого образца в количестве, соответствующем числу градуировочных уровней. В каждую навеску вносят раствор с содержанием исследуемых компонентов на соответствующем градуировочном уровне. Проводят пробоподготовку в соответствии с видом продукции. Получают от 3 до 6 см ³ экстракта с соответствующей концентрацией исследуемых веществ для каждого градуировочного уровня.

6.9. Установление градуировочных характеристик. Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площадей пиков от концентраций исследуемых веществ в растворе (мкг/см ³), устанавливают методом абсолютной калибровки на растворителе либо матричной калибровки по не менее чем 5 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят необходимый объем каждого градуировочного раствора и анализируют в соответствующих условиях хроматографирования. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.

VII. Отбор и хранение проб

7.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами ².

------------------------------

²_{Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.}

------------------------------

7.2. Растительные пробы (свежие) хранят при температуре плюс (2 - 6) °C не более недели, сухие продукты хранят в сухом проветриваемом помещении при комнатной температуре не более двух недель. Для длительного хранения образцы помещают в морозильную камеру при температуре не выше минус 18 °C.

В таблице 7.1 представлены группы продуктов и их предварительная подготовка перед анализом.

Таблица 7.1

Группы растительной продукции и предварительная подготовка образцов

N п/п	Наименование группы	Представители группы	Описание группы	Предварительная подготовка
1	2	3	4	5
1	Корнеплоды и клубнеплоды	Свекла, редис, морковь, свекла сахарная, сельдерей корневой, батат, пастернак, репа, картофель, ямс, редис	Корнеплоды и клубнеплоды - крахмалосодержащие пищевые продукты, получаемые из крупных твердых корней, клубней, клубнелуковиц или корневищ (обычно подземных) различных видов растений. В пищу может употребляться продукт целиком.	Продукт берется в анализ целиком после удаления верхней части. Промыть корнеплоды или клубнеплоды в холодной проточной воде, осторожно удалив, при необходимости, мягкой щеткой рыхлую землю и ее остатки, а затем удалить воду, слегка промокнув чистой бумажной салфеткой. У моркови после удаления воды осторожно отрезать верхушку ножом / в месте примыкания к плоду внешних черешков. Если при этом от воронкообразной верхушки корнеплода отделяется кольцеобразное тело, то оно должно оставаться с корнеплодом.
2	Луковичные	Чеснок, лук-репка, лук-порей, лук зеленый	Луковичные - пищевые культуры с острым вкусом и сильным запахом мясистых слоистых луковиц или почек семейства лилейных. В пищу употребляется луковица целиком после удаления верхних сухих чешуек	Лук и чеснок (луковицы или сушеные): продукт берется в анализ целиком после удаления корней и легкоудаляемых верхних сухих чешуек. Лук-порей и лук зеленый: все растение после удаления корней и земли
3	Зеленые овощи (кроме культур Группы 4)	Ботва свекольная, ботва редиса, валериана овощная, шпинат, эндивий зимний, ботва свеклы сахарной, салат-латук, свекла листовая	Зеленые овощи (кроме культур Группы 4) - представляют собой листья самых разнообразных съедобных растений, включая лиственную часть овощей Группы 1. В пищу может употребляться продукт целиком	Продукт берется в анализ целиком после удаления явно разложившихся или увядших листьев
4	Овощи зеленые семейства капустных	Брокколи, капуста цветная, капуста брюссельская, капуста листовая, капуста кочанная, капуста китайская, кольраби, капуста краснокочанная, ботва горчичная, капуста савойская	Овощи зеленые семейства капустных представляют собой листовые части, стебли и незрелые соцветия растений, обычно называемые как "капуста". В пищу может употребляться продукт целиком	Продукт берется в анализ целиком после удаления явно разложившихся или увядших листьев. Для цветной капусты и брокколи - соцветия и стебли без листьев; для капусты брюссельской - только кочанчики
5	Овощи стебельные	Артишок, цикорий (обыкновенный), сельдерей, ревень	Овощи стебельные представляют собой съедобные стебли или побеги разнообразных растений	Продукт берется в анализ целиком после удаления явно разложившихся или увядших листьев Ревень и спаржа - только стебли. Ревень и спаржа: удалить землю (промыв струей воды или осторожно обтерев сухой продукт)
6	Бобовые	Фасоль, бобы турецкие, бобы кормовые, фасоль огневокрасная, фасоль обыкновенная, фасоль ломкая, фасоль французская, соя (бобы), фасоль зеленая, горох, фасоль красная, вигна китайская, фасоль лимская, горошек сладкий	Бобовые представляют собой сухие или сочные семена или невызревшие стручки или растения семейства бобовых, известные как фасоль и горох. Сочные виды могут потребляться вместе со стручками или лущеными. Бобовые фуражные культуры относятся к Группе 18	Продукт берется в анализ целиком
7	Овощи плодовые со съедобной кожурой	Огурец, перец, баклажан, кабачок, корнишон, томат, бамия (окра)	Овощи плодовые со съедобной кожурой представляют собой невызревшие или вызревшие плоды различных растений - обычно однолетних вьющихся или кустарников. В пищу может употребляться растение целиком	Продукт берется в анализ целиком после удаления стеблей
8	Овощи плодовые с несъедобной кожурой	Тыквенные с твердой кожурой: дыня, арбуз, тыква	Овощи плодовые с несъедобной кожурой представляют собой невызревшие или вызревшие плоды различных растений - обычно однолетних вьющихся или кустарников. Съедобная часть плода защищена кожурой, шкуркой или оболочкой, которая удаляется перед употреблением	Продукт берется в анализ целиком после удаления стеблей
9	Цитрусовые	Грейпфрут, лимон, лайм, апельсин, мандарин, танжерины	Плоды цитрусовых, произрастающие на деревьях семейства рутовых, имеют плоды шаровидной формы, покрытые пахучей богатой маслами кожурой, внутри которых находятся сочные дольки (везикулы). На протяжении вегетативного периода плоды подвергаются полной обработке пестицидами. Плодовая мякоть может употребляться в виде долек или для изготовления соков. Консервировать можно плод целиком	Продукт берется в анализ целиком. Если норматив контроля (МДУ) установлен на мякоть цитрусовых, то в анализ берется продукт без кожуры
10	Семечковые	Яблоко, айва, груша	Плоды семечковых произрастают на деревьях рода листопадных (genuspyrus) семейства розовоцветных (Rosaceae). Плоды состоят из мясистой ткани вокруг центральной части, сформированной плодолистиками, укрывающими семена. В пищу может потребляться весь плод как в свежем, так и в переработанном виде	Продукт берется в анализ целиком после удаления плодоножки
11	Косточковые	Абрикос, нектарин, вишня, персик, морель, слива, черешня	Плоды косточковых с сочным околоплодником вокруг одного твердого семени (костянки) произрастают на деревьях рода слива семейства розовоцветных (Rosaceae). В пищу может потребляться весь плод за исключением косточки как в свежем, так и в переработанном виде	Продукт берется в анализ целиком после удаления плодоножек и косточек, при необходимости расчета содержания на исходный продукт (с косточкой), проводят пересчет, взвешивая образец до и после извлечения косточек
12	Ягоды (плоды кустовых и ягодных растений)	Ежевика, крыжовник, голубика, виноград, ежемалина, логанова ягода, клюква, малина, смородина, земляника	Плоды кустовых и ягодных растений произрастают на самых разнообразных растениях, и для них характерно высокое соотношение площади поверхности к весу плода. В пищу может потребляться весь плод, включая косточки, как в свежем, так и в переработанном виде	Продукт берется в анализ целиком после удаления верхушек и плодоножек. Смородина: анализируются плоды с плодоножкой
13	Плоды со съедобной кожурой	Финики, оливы, инжир	Плоды разные со съедобной кожурой представляют собой невызревшие или вызревшие плоды различных растений - обычно кустов и деревьев тропических или субтропических регионов. В пищу может потребляться весь плод как в свежем, так и в переработанном виде	Финики и оливы: продукт берется в анализ целиком после удаления плодоножек и косточек, при необходимости расчета содержания на исходный продукт (с косточкой), проводят пересчет, взвешивая образец до и после извлечения косточек. Инжир: продукт берется в анализ целиком
14	Плоды с несъедобной кожурой	Авокадо, манго, бананы, папайя, гуава, маракуйя, киви, ананас	Плоды разные с несъедобной кожурой представляют собой невызревшие или вызревшие плоды различных растений - обычно кустов и деревьев тропических или субтропических регионов. Съедобная часть плода защищена кожурой, шкуркой или оболочкой. Плод можно употреблять в свежем или переработанном виде	Продукт берется в анализ целиком, если иное конкретно не оговорено. Ананас: берется в анализ целиком после удаления верхушки. Авокадо и манго: продукт берется в анализ целиком после удаления косточек, при необходимости расчета содержания на исходный продукт (с косточкой), образец необходимо взвесить до и после извлечения косточек. Бананы: после удаления плодоножек
15	Зерновые	Ячмень, рожь, кукуруза, сорго, овес, рис, пшеница	Зерновые злаки получаются из колосков с крахмалистым эндоспермом разнообразных растений семейства злаков (Gramineae). Перед употреблением шелуха удаляется	Продукт берется в анализ целиком. Сладкая кукуруза: зерно с кочерыжкой без листовой обертки (початок)
16	Травянистые растения	Ячменная зеленая масса и солома, кукуруза кормовая, травы кормовые, сорго кормовое	К травянистым растениям относятся различные виды растений, в основном семейства злаков (Gramineae), повсеместно культивируемые на корм скоту и для производства сахара. Стебли используются на корм скоту и потребляются в виде зеленого фуража, силоса, либо сухого корма или сена. Сахароносные культуры перерабатываются	Продукт берется в анализ целиком
17	Масличные бобовые	Арахис	Масличные бобовые - зрелые семена бобовых, выращиваемых для переработки на пищевые растительные масла или для использования непосредственно в качестве продукта питания людей	Продукт берется в анализ целиком после удаления кожуры
18	Бобовые фуражные культуры	Люцерна кормовая, земляной орех, кормовая фасоль, кормовой горох, кормовой клевер, кормовая соя	Бобовые фуражные культуры - различные виды бобовых, используемые на корм скоту в виде подножного корма, сена или силоса с семенами или без. Бобовые фуражные культуры употребляются в виде зеленых кормов, либо сухого корма или сена	Продукт берется в анализ целиком
19	Орехи	Миндаль, орех, макадамия, каштан, пекан, фундук, грецкий орех	Орехи представляют собой семена ряда деревьев или кустарников, состоящие из несъедобной твердой оболочки и ядра с высоким содержанием масел. Съедобная часть ореха может потребляться целиком в свежем, сушеном или переработанном виде	Продукт берется в анализ целиком после удаления скорлупы. Каштан: берется в анализ целиком с кожурой.
20	Семена масличных культур	Семена хлопчатника, сафлора, льна, подсолнечника, рапса	Семена масличных культур представляют собой семена различных растений, используемые для производства пищевых растительных масел. Некоторые имеющие большое значение масличные семена получаются в качестве побочной продукции переработки волокнистых или плодовых культур	Продукт берется в анализ целиком
21	Семена тропических растений	Какао-бобы, кофе (бобы)	К семенам тропических растений относятся семена нескольких видов тропических и субтропических деревьев и кустарников, которые используются в производстве безалкогольных напитков и сладостей. Семена тропических растений употребляются после переработки	Продукт берется в анализ целиком
22	Ароматические растения	Пастернак, хрен, розмарин, мята, тимьян и другие	Ароматические растения представляют собой листья, стебли и корни разнообразных травянистых растений, используемые в относительно небольших количествах для придания аромата другим продуктам питания. Употребляются в свежем или сушеном виде в качестве ингредиентов при приготовлении пищи	Продукт берется в анализ целиком
23	Пряности	Ваниль, гвоздика, имбирь, калган, кардамон, корица, куркума, лавр, мускатный орех, перец черный, белый и другие, душистые перцы, цедра, шафран	К пряностям относятся семена, корни, плоды и ягоды разнообразных растений, используемые в относительно небольших количествах для придания аромата другим продуктам питания. Употребляются преимущественно в свежем или сушеном виде в качестве ингредиентов при приготовлении пищи	Продукт берется в анализ целиком
24	Чай	-	Чаи получаются из листьев нескольких видов растений - главным образом из чая китайского (Camellia sinensis). Используются для приготовления настоев для употребления в качестве стимулирующих напитков. Употребляются в виде экстрактов высушенной или переработанной исходной продукции	Продукт берется в анализ целиком

7.3. Перед анализом образцы измельчают, при необходимости с сухим льдом. Измельченные или гомогенизированные образцы подлежат анализу или длительному хранению при температуре не выше минус 18 °C.

Примечание. Необходимо учитывать, что процедура измельчения и гомогенизации может существенно повлиять на результаты анализа.

Продукт должен быть измельчен и хорошо перемешан, чтобы можно было взять репрезентативные навески. Методы измельчения и смешивания должны быть подобраны в зависимости от целевых аналитов и особенностей пробы. Например, для измельчения плодоовощной продукции с высоким содержанием воды предпочтительно использование ножевых мельниц (блендеров или куттеров); для измельчения зерновых проб предпочтительны дисковые мельницы (дезинтеграторы), которые обеспечивают короткое время размола и низкий разогрев пробы, но требуют дополнительной гомогенизации. При необходимости (термолабильные аналиты или высокое содержание жиров в продукте) аналитическая проба должна обрабатываться в особых условиях, т.е. при минусовой температуре.

Измельчаемый образец может готовиться из целых единиц или из сегментов, выделенных из целых единиц (в частности, в случае крупных плодов - арбуз, дыня, тыква). Если измельченный образец изготовлен из нескольких единиц или сегментов, желательно провести исследование нескольких параллельных проб.

Выделение части пробы насыпных продуктов для дальнейшего измельчения включает процедуру ручного квартования пробы или ее разделения на автоматических делителях, выпускаемых серийно.

VIII. Выполнение определения

8.1. Экстракция.

8.1.1. Экстракция без гидролиза

8.1.1.1. Экстракция из овощей и фруктов (соки) с высоким содержанием воды (более 80 %).

Измельченный образец массой (100,1) г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³. Вносят 10 см ³ ацетонитрила, при необходимости в пробирку помещают керамический гомогенизатор, закрывают крышкой и интенсивно встряхивают в течение 1 - 3 мин с использованием вихревого шейкера (при отсутствии вихревого шейкера - с использованием орбитального, увеличивая время экстракции до 25 - 30 минут). Время экстракции из замороженных образцов можно увеличить до 15 мин, используя при необходимости шейкер (вортекс).

Добавляют в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 6.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и аликвоту надосадочной жидкости подвергают очистке (при необходимости) с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 8.2.

Экстракция из овощей и фруктов (соки) с высоким содержанием воды (более 80 %) в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 1.1 приложения 5.

8.1.1.2. Экстракция из овощей и фруктов (соки) с высоким содержанием воды (более 80 %) и высокой кислотностью.

Измельченный образец массой (100,1) г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³. Вносят 10 см ³ ацетонитрила, добавляют 600 мм ³ 5 М раствора натрия гидроксида (п. 6.2) при анализе образцов цитрусовых (лимон, лайм) и ягод смородины или 200 мм ³ 5 М раствора натрия гидроксида (п. 6.2) при анализе ягод (крыжовник, ежевика, малина) и ревеня. При необходимости в пробирку помещают керамический гомогенизатор, закрывают крышкой и интенсивно встряхивают в течение 1 - 3 мин с использованием вихревого шейкера (при отсутствии вихревого шейкера - с использованием орбитального, увеличивая время экстракции до 25 - 30 минут). Время экстракции из замороженных образцов можно увеличить до 15 мин, используя при необходимости шейкер (вортекс).

Добавляют в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 6.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и подвергают очистке (при необходимости) с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 8.2.

Примечание 1. Для проб с высоким уровнем кислотности (pH < 3) значение pH, полученное после добавления буферных солей, обычно составляет менее пяти. Чтобы обезопасить от распада соединения, неустойчивые к кислотам, значение pH можно увеличить путем добавления в экстракт 5 М раствора натрия гидроксида (п. 6.2).

Примечание 2. Отдельные пестициды (например, дитианон) удовлетворительно извлекаются из продуктов при pH 2. В этом случае, после добавления ацетонитрила в пробу, проверяют pH среды с помощью индикаторной бумаги, при необходимости доводят его значение до величины не более 2, используя уксусную или муравьиную кислоту. Раствор гидроксида натрия в образец не вносят.

Экстракция из овощей и фруктов (соки) с высоким содержанием воды (более 80 %) и высокой кислотностью в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 1.2 приложения 5.

8.1.1.3. Экстракция из овощей и фруктов (соки) с более низким содержанием воды (более 40 %, но менее 80 %).

Измельченный образец массой (100,1) г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³. Вносят достаточное количество бидистиллированной (деионизированной) воды так, чтобы общее содержание воды было близко к 10 см ³. При анализе образцов бананов, стручковой фасоли, кукурузы, картофеля, листьев винограда, свежих ароматических растений (пастернак, хрен, розмарин, мята, тимьян и другие) добавляется 2,5 см ³ воды. При анализе образцов каштанов, фиников, семян гинкго, хлеба, зародышей пшеницы добавляют 4,5 см ³ воды, затем вносят 10 см ³ ацетонитрила, закрывают крышкой и интенсивно встряхивают в течение 1 - 3 мин с использованием вихревого шейкера. При отсутствии вихревого шейкера - с использованием орбитального, увеличивая время экстракции до 25 - 30 минут. Время экстракции из замороженных образцов можно увеличить до 15 мин, используя при необходимости шейкер (вортекс).

Добавляют в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 6.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и подвергают очистке (при необходимости) с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 8.2.

Экстракция из овощей и фруктов (соки) с более низким содержанием воды (более 40 %, но менее 80 %) в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 1.3 приложения 5.

8.1.1.4. Экстракция из сухих фруктов и овощей с низким содержанием воды (более 15 %, но менее 40 %).

Пробы сухих фруктов и овощей при подготовке к анализу гомогенизируются после добавления холодной воды (температура воды плюс 4 °C). К 500 г сухого продукта добавляют 850 см ³ дистиллированной воды и гомогенизируют.

Навеску гомогенизированного образца (13,50,13) г (соответствует 5 г образца) помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³. Вносят 10 см ³ ацетонитрила, при необходимости в пробирку помещают керамический гомогенизатор, закрывают крышкой и интенсивно встряхивают в течение 1 - 3 мин с использованием вихревого шейкера. Время экстракции для замороженных гомогенизированных образцов рекомендуется увеличить до 15 мин. При отсутствии вихревого шейкера возможно использование орбитального, при этом время экстракции увеличивается до 25 - 30 минут.

Добавляют в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 6.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и подвергают очистке (при необходимости) с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 8.2.

Примечание. Если на исследуемый сухой продукт отсутствуют нормативы контроля, то полученный результат возможно пересчитать на исходный сырой продукт по формуле:

(1)

где X - массовая доля компонента в пробе, мг/кг;

m ₁ - масса сухого продукта, использованного для приготовления исходного сырого продукта с учетом содержания воды, г;

m ₂ - масса воды, необходимая для приготовления исходного сырого продукта, г.

Пример пересчета на исходный сырой продукт: при анализе 5 г абрикоса сушеного с содержанием воды 20 %, подготовленного к анализу по п. 8.1.1.4 на содержание хлорпирифоса, получен результат 0,1 мг/кг. Содержание воды в свежем абрикосе составляет 85 % (приложение 3). Для пересчета на исходный продукт (свежий абрикос) вычисляем количество воды m ₂, необходимое для восстановления 5 г сухого продукта, содержащего 20 % воды, до исходного продукта, содержащего 85 % воды по формуле:

(2)

где m ₁ - масса сухого продукта, использованного для приготовления исходного сырого продукта с учетом содержания воды, г;

m ₂ - масса воды, необходимая для приготовления исходного сырого продукта, г;

x _k - массовая доля воды в исходном сыром продукте, доля;

х _i - массовая доля воды в сухом продукте, доля.

m ₂ = (0,85-0,2)·5/(1-0,85) = 21,65 г

Для получения массы исходного продукта, содержащего 85 % воды, к 5 г сухого продукта, содержащего 20 % воды, необходимо добавить 21,65 г воды.

Подставляем в формулу (1) полученные значения: (0,1*5)/(5+21,65) = 0,02 мг/кг. Результат пересчета: содержание хлорпирифоса в пересчете на исходный сырой продукт составляет 0,02 мг/кг.

Содержание воды в некоторых видах пищевой продукции приведено в приложении 3.

Экстракция из сухих фруктов и овощей с низким содержанием воды (более 15 %, но менее 40 %) в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 1.4 приложения 5.

8.1.1.5. Экстракция из растительной продукции (зерно злаков, зерновая продукция, зернобобовые, семена масличных культур) с низким содержанием воды (менее 15 %).

Измельченный образец массой (50,05) г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³. Вносят 10 см ³ бидистиллированной (деионизированной) воды, затем 10 см ³ ацетонитрила, закрывают крышкой и интенсивно встряхивают в течение 15 мин с использованием вихревого шейкера или встряхивают вручную в течение 1 мин, оставляют на 15 мин и затем снова встряхивают в течение 1 мин. При отсутствии вихревого шейкера используют орбитальный, увеличивая время экстракции до 25 - 30 минут.

В пробирку помещают керамический гомогенизатор (при необходимости), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают вручную 1 мин, добавляют в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 6.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и подвергают очистке (при необходимости) с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 8.2.

Экстракция из растительной продукции (зерно злаков, зерновая продукция, зернобобовые, семена масличных культур) с низким содержанием воды (менее 15 %) в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 1.5 приложения 5.

8.1.1.6. Экстракция из продуктов со средним содержанием воды (более 40 %, но менее 80 %) и высоким содержанием жира (более 5 %) и/или высоким эффектом матрицы.

Измельченный образец массой (50,05) г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³. Вносят 6 см ³ воды, затем вносят 10 см ³ ацетонитрила, при необходимости в пробирку помещают керамический гомогенизатор, закрывают крышкой и интенсивно встряхивают в течение 1 - 3 мин с использованием вихревого шейкера. При отсутствии вихревого шейкера - с использованием орбитального, увеличивая время экстракции до 25 - 30 минут. Время экстракции из замороженных образцов можно увеличить (при необходимости) до 15 мин, используя при необходимости шейкер (вортекс).

Добавляют в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 6.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и подвергают очистке (при необходимости) с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 8.2.

Экстракция из продуктов со средним содержанием воды (более 40 %, но менее 80 %) и высоким содержанием жира (более 5 %) и/или высоким эффектом матрицы в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 1.6 приложения 5.

8.1.1.7. Экстракция из растительной продукции (специи, кофе, табак, чай, а также фрукты и овощи, высушенные методом сублимации) с низким содержанием воды (менее 10 %) и высоким эффектом матрицы.

Измельченный образец массой (20,02) г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³. Вносят 10 см ³ бидистиллированной (деионизированной) воды, затем 10 см ³ ацетонитрила, при необходимости в пробирку помещают керамический гомогенизатор, закрывают крышкой и интенсивно встряхивают в течение 15 мин с использованием вихревого шейкера (вортекс) или встряхивают вручную в течение 1 мин, оставляют на 15 мин и затем снова встряхивают в течение 1 мин.

Добавляют в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 6.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и подвергают очистке (при необходимости) с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 8.2.

Примечание 1. Для проб с высоким уровнем кислотности (pH < 3) значение pH, полученное после добавления буферных солей, обычно составляет менее пяти. Чтобы обезопасить от распада соединения, неустойчивые к кислотам, значение pH можно увеличить путем добавления в экстракт 5 М раствора натрия гидроксида (п. 6.2).

Примечание 2. Отдельные пестициды (например, дитианон) удовлетворительно извлекаются из продуктов при pH 2. В этом случае, после добавления ацетонитрила в пробу, проверяют pH среды с помощью индикаторной бумаги, при необходимости доводят его значение до величины не более 2, используя уксусную или муравьиную кислоту. Раствор гидроксида натрия в образец не вносят (п. 6.2).

Примечание 3. Если на исследуемый сублимированный продукт (фрукты, овощи) отсутствуют нормативы контроля, то полученный результат пересчитывают на исходный сырой продукт по формуле (1). Содержание воды в некоторых видах пищевой продукции приведено в приложении 3.

Экстракция из растительной продукции (специи, кофе, табак, чай, а также фрукты и овощи, высушенные методом сублимации) с низким содержанием воды (менее 10 %) и высоким эффектом матрицы в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 1.7 приложения 5.

8.1.2. Экстракция с проведением гидролиза

Экстракция остаточных количеств кислотных пестицидов, определение которых, помимо свободных кислот, включает также эфиры и/или конъюгаты, которые подвергаются щелочному гидролизу (стандартные условия для гидролиза конъюгатов и эфиров 2,4-Д, амидопиралида, клопиралида, пиклорама, дихлорпропа-П, флуазифопа-П, флуроксипира, галоксифопа-П, МСРА).

8.1.2.1. Экстракция из растительной продукции с высоким содержанием воды (более 80 %).

Образец измельченной пробы массой (100,1) г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³. Вносят 10 см ³ ацетонитрила, добавляют 2 см ³ 5 М раствора гидроксида натрия (подготовленного по п. 6.2) при анализе образцов цитрусовых (лимон, лайм, апельсин, мандарин и другие) и 1 см ³ 5 М раствора гидроксида натрия (п. 6.2) при анализе обычных овощей и фруктов. Интенсивно встряхивают вручную. Далее пробирку с образцом помещают в термостат, поддерживающий температуру 40 °C, на 30 мин. При этом ее через определенные промежутки времени (10 мин) вынимают из термостата и встряхивают вручную в течение 25 - 30 сек.

Для нейтрализации избыточного количества щелочи добавляют 1,4 см ³ 2,5 М раствора серной кислоты (подготовленного по п. 6.3) для образцов цитрусовых и 1,0 см ³ 2,5 М раствора серной кислоты (подготовленного по п. 6.3) для обычных овощей и фруктов.

Затем в пробирку добавляют смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 6.7), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и подвергают очистке (при необходимости) с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 8.2.

Экстракция с проведением гидролиза из растительной продукции с высоким содержанием воды (более 80 %) в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 1.8 приложения 5.

8.1.2.2. Экстракция из растительной продукции с низким содержанием воды (менее 80 %).

Образец измельченной пробы массой (50,05) г для продуктов с содержанием воды менее 15 % или с содержанием воды от 40 % до 80 % помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³, добавляют 10 см ³ или 6 см ³ воды соответственно. Образец измельченной пробы массой (20,02) г для продуктов с содержанием воды менее 10 % помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³, добавляют 10 см ³ воды. Вносят 10 см ³ ацетонитрила, добавляют 1 см ³ 5 М раствора гидроксида натрия (подготовленного по п. 6.2), интенсивно встряхивают вручную. Пробирку помещают в термостат, поддерживающий температуру 40 °C, на 30 мин. При этом пробирку через определенные промежутки времени (10 мин) вынимают из термостата и встряхивают вручную в течение 25 - 30 сек.

Для нейтрализации избыточного количества щелочи добавляют 1,0 см ³ 2,5 М раствора серной кислоты (подготовленного по п. 6.3).

Затем в пробирку добавляют смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 6.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и подвергают очистке (при необходимости) с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 8.2.

Экстракция с проведением гидролиза из растительной продукции с низким содержанием воды (менее 80 %) в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 1.9 приложения 5.

Примечание. Пробы сухих фруктов и овощей (с содержанием воды более 15 %, но менее 40 %) при подготовке к анализу гомогенизируются после добавления холодной воды (температура воды плюс 4 °C). К 500 г сухого продукта добавляют 850 см ³ бидистиллированной (деионизированной) воды и гомогенизируют.

Навеску гомогенизированного образца (13,50,13) г (соответствует 5 г образца) подвергают экстракции в соответствии с п. 8.1.2.1.

8.1.3. Экстракция для определения остаточных количеств полярных пестицидов (диквата (дибромида), хлормеквата, мепиквата, фосэтила алюминия, глифосата и его метаболита аминометилфосфоновой кислоты (АМФК), глюфосината аммония и его метаболита 3-Метилфосфинопропионовой кислоты (МФПК).

8.1.3.1. Экстракция из растительной продукции с высоким содержанием воды (более 45 %).

Образец измельченной пробы массой (100,1) г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³, вносят 10 см ³ раствора для экстракции полярных пестицидов, подготовленного по п. 6.5, закрывают крышкой и интенсивно встряхивают не менее 5 минут, используя вихревой шейкер (вортекс).

Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и (при необходимости) подвергают вымораживанию в течение не менее 2 часов при температуре не выше минус 18 °C.

После вымораживания повторно центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и аликвоту надосадочной жидкости переносят в виалу или пластиковую вставку, согласно требованиям к анализируемому веществу, и проводят анализ при помощи ВЭЖХ-МС/МС.

Экстракция полярных пестицидов из растительной продукции с высоким содержанием воды (более 45 %) в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 1.10 приложения 5.

8.1.3.2. Экстракция из растительной продукции с низким содержанием воды (менее 45 %).

Образец измельченной пробы массой (50,05) г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³, вносят 10 см ³ бидистиллированной (деионизированной) воды, затем 10 см ³ раствора для экстракции полярных пестицидов, подготовленного по п. 6.5, закрывают крышкой и интенсивно встряхивают не менее 5 минут, используя вихревой шейкер.

Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и (при необходимости) подвергают вымораживанию в течение не менее 2 часов при температуре не выше минус 18 °C.

После вымораживания повторно центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин и аликвоту надосадочной жидкости переносят в виалу или пластиковую вставку, согласно требованиям к анализируемому веществу, и проводят анализ методом ВЭЖХ-МС/МС.

Экстракция полярных пестицидов из растительной продукции с низким содержанием воды (менее 45 %) в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 1.11 приложения 5.

8.2. Очистка экстрактов.

8.2.1. Очистка экстракта вымораживанием.

Вымораживание способствует очистке экстрактов, полученных по п.п. 8.1.1.2, 8.1.1.5, 8.1.1.6, 8.1.2.1, 8.1.2.2, 8.1.3.1 и 8.1.3.2 от экстрагированных масел и жира, воска и сахаров. Процедура вымораживания также может применяться в сочетании с другими способами очистки (п.п. 8.2.2 - 8.2.4). В приложении 2 приведены продукты, для которых предпочтительно использовать вымораживание. После экстракции 8 см ³ центрифугированной надосадочной жидкости помещают в центрифужную пробирку вместимостью 15 см ³ и оставляют на ночь (при пылевидном материале достаточно 2 часов) в морозильнике при температуре не выше минус 18 °C.

После вымораживания холодный экстракт центрифугируют в течение 1 мин при скорости вращения 4500 об/мин. При необходимости дальнейшей очистки вымороженного экстракта отбирают 6 см ³ холодного экстракта и подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п.п. 8.2.2 - 8.2.4.

Очистка экстракта вымораживанием в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 2.1 приложения 5 к настоящим МУК.

8.2.2. Очистка экстракта методом дисперсионной твердофазной экстракции смесью сорбентов на основе первичных и вторичных аминов.

Аликвоту экстракта (верхний ацетонитрильный слой) объемом 6 см ³ с помощью пипетки или дозатора переносят в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см ³, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 6.7.1 или 6.7.2 или 6.7.3 (приложение 2 к настоящим МУК). Интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин, далее с интенсивностью не менее 1500 об/мин перемешивают на вихревом шейкере (вортекс) в течение 1 - 3 мин, после чего центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин.

Аликвоту (2 см ³) полученного экстракта фильтруют (при необходимости) через мембранный фильтр в виалу и подвергают (если применимо) стабилизации (п. 8.4). Выбор фильтрующего материала зависит от свойств конкретного аналита и фильтруемого экстракта.

Примечание. При выявлении факта недостаточности очистки методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением сорбента с содержанием 150 мг первичных и вторичных аминов возможно использовать сорбент с увеличенным содержанием первичных и вторичных аминов 300 мг или 450 мг.

Очистка экстракта методом дисперсионной твердофазной экстракции сорбентом на основе первичных и вторичных аминов в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 2.2 приложения 5 к настоящим МУК.

8.2.3. Очистка экстракта методом дисперсионной твердофазной экстракции смесью сорбентов на основе первичных и вторичных аминов с добавлением октадецилсилана (очистка экстрактов с высоким содержанием липидов).

Аликвоту экстракта (верхний ацетонитрильный слой) объемом 6 см ³ с помощью пипетки или дозатора переносят в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см ³, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 6.7.4. Интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин, далее с интенсивностью не менее 1500 об/мин перемешивают на вихревом шейкере (вортекс) в течение 1 - 3 мин, после чего центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин.

Аликвоту (2 см ³) полученного экстракта фильтруют (при необходимости) через мембранный фильтр в виалу и подвергают (если применимо) стабилизации (п. 8.4). Выбор фильтрующего материала зависит от свойств конкретного аналита и фильтруемого экстракта.

Очистка экстракта методом дисперсионной твердофазной экстракции смесью сорбентов на основе первичных и вторичных аминов с добавлением октадецилсилана (очистка экстрактов с высоким содержанием липидов) в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 2.3 приложения 5 к МУК.

8.2.4. Очистка экстракта методом дисперсионной твердофазной экстракции смесью сорбентов на основе первичных и вторичных аминов с добавлением графитизированной сажи (очистка экстрактов с высоким содержанием пигментов).

Аликвоту экстракта (верхний ацетонитрильный слой) объемом 6 см ³ с помощью пипетки переносят в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см ³, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 6.7.5 или 6.7.6. Интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин, далее с интенсивностью не менее 1500 об/мин перемешивают на вихревом шейкере (вортекс) в течение 1 - 3 мин, после чего центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин при температуре плюс (15 - 25) °C.

Аликвоту (2 см ³) полученного экстракта фильтруют (при необходимости) через мембранный фильтр в виалу и подвергают (если применимо) стабилизации (п. 8.4). Выбор фильтрующего материала зависит от свойств конкретного аналита и фильтруемого экстракта.

Примечание. Некоторые пестициды, имеющие планарную структуру (карбендазим, тиабендазол, хлороталонил и другие), имеют большое химическое сродство к планарной структуре графитизированной сажи. Чтобы избежать потерь планарных пестицидов при очистке, в экстракт предварительно вносят толуол из расчета 325 мм ³ толуола на 2 см ³ экстракта, что позволяет устранить сорбцию планарных пестицидов графитизированной сажей. При внесении в экстракт толуола в данном объеме в формулу расчета необходимо ввести коэффициент, учитывающий разбавление образца в 1,1625 раз.

Очистка экстракта методом дисперсионной твердофазной экстракции смесью сорбентов на основе первичных и вторичных аминов с добавлением графитизированной сажи (очистка экстрактов с высоким содержанием пигментов) в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 2.4 приложения 5 к настоящим МУК.

Рекомендуемые способы экстракции и очистки некоторых видов продукции и сырья растительного происхождения с отсылкой к соответствующим пунктам методики представлены в приложении 2 к настоящим МУК.

8.3. Разбавление экстракта.

Для уменьшения влияния матрицы аликвоту неочищенного экстракта можно разбавить в определенном объеме подходящего растворителя или матричного раствора холостого образца, если это позволяет чувствительность используемого оборудования. Кратность разбавления необходимо учитывать в расчетах.

Примечание. Для высокополярных действующих веществ пестицидов (метаболитов), экстрагируемых метанолом, содержащим 1 % муравьиной кислоты (п. 8.1.3), а также кислотных пестицидов, экстрагируемых по п. 8.1.2, приемлем прием очистки экстрактов согласно п. 8.2.1 (вымораживание), а также разбавление экстрактов (преимущественно ацетонитрилом) согласно п. 8.3.

Очистка экстракта разбавлением в виде блок-схемы (последовательности операций) представлена в п. 3 приложения 5 к настоящим МУК.

8.4. Стабилизация экстрактов при проведении анализа и хранении.

Для минимизации потерь большинства определяемых аналитов перед анализом рекомендуется проведение стабилизации полученных экстрактов внесением 5 %-го раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, приготовленного по п. 6.4, из расчета 10 мм ³ на 1 см ³ экстракта.

Примечание. Разбавление, обусловленное стабилизацией экстракта, может не учитываться при расчете массовой концентрации аналита в конечном экстракте.

Процедура стабилизации используется для поддержания стабильности действующих веществ в экстрактах и градуировочных растворах при их анализе и хранении.

При анализе соединений, неустойчивых к действию кислот (например, амидосульфурон, триасульфурон, метсульфурон-метил, никосульфурон, римсульфурон, трибенурон, трифлусульфурон и другие), полученный экстракт анализируется и/или хранится без стабилизации.

8.5. Дополнительная подготовка экстрактов перед анализом (при необходимости). В процессе пробоподготовки перед хроматографическим анализом полученный экстракт (при необходимости) перерастворяют в подходящем растворителе или смеси растворителей. Для этого аликвоту ацетонитрильного экстракта упаривают в токе инертного газа или воздуха с применением упаривателя-концентратора, сухой остаток растворяют в точном объеме органического растворителя. Объемы растворов учитывают при выполнении расчетов.

Примечание. При невозможности достижения желаемых пределов обнаружения исследуемых соединений рекомендуется концентрирование конечных экстрактов в 10 и более раз. Для этого от 2 до 4 см ³ экстракта упаривают в токе инертного газа или воздуха, сухой остаток растворяют в 150 - 400 мм ³ органического растворителя или матричного раствора и помещают в стеклянные или полипропиленовые вставки для виал.

Полученные экстракты анализируют с использованием газового и/или жидкостного хроматографа с масс-спектрометрическим детектором.

В приложении 6 к настоящим МУК приведены примеры хроматографического анализа с масс-спектрометрическим детектированием методами ВЭЖХ-МС/МС, ГХ-МС, ГХ-МС/МС.

Приложение 7 к настоящим МУК содержит условные обозначения и сокращения, используемые в тексте методики.

Библиографические ссылки

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

3. ГОСТ OIML R 111-1 "Межгосударственный стандарт. Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов Е(1), Е(2), F(1), F(2), М(1), М(1-2), М(2), М(2-3) и М(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

4. ГОСТ 1770 "Межгосударственный стандарт. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

5. ГОСТ 29227 "Межгосударственный стандарт. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

6. ГОСТ 25336 "Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

7. ГОСТ 9293 (ИСО 2435) "Межгосударственный стандарт. Азот газообразный и жидкий. Технические условия".

8. ГОСТ 10157 "Межгосударственный стандарт. Аргон газообразный и жидкий. Технические условия".

9. ГОСТ 2603 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Ацетон. Технические условия".

10. ГОСТ 3117 "Государственный стандарт союза ССР. Реактивы. Аммоний уксуснокислый. Технические условия".

11. ГОСТ 12162 "Государственный стандарт союза ССР. Двуокись углерода твердая. Технические условия".

12. ГОСТ 6995 "Государственный стандарт союза ССР. Реактивы. Метанол-яд. Технические условия".

13. ГОСТ 5848 "Государственный стандарт союза ССР. Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия".

14. ГОСТ 4233 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

15. ГОСТ 4328 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия".

16. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

17. ГОСТ ISO 7886-1 "Межгосударственный стандарт. Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования".

18. ГОСТ 4204 "Государственный стандарт союза ССР. Реактивы. Кислота серная. Технические условия".

19. ГОСТ 61 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия".

20. ГОСТ 22300 "Межгосударственный стандарт. Эфиры этиловый и нормальный бутиловый уксусной кислоты. Технические условия".

21. ГОСТ 12.1.004 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".

22. ГОСТ 12.1.007 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

23. ГОСТ 12.1.019 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

24. ГОСТ 12.0.004 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения".

25. ГОСТ 12.4.009 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

26. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

27. МУК 4.1.3351-16 "Многоостаточное определение пестицидов различной химической природы в продукции растениеводства: Методические указания".

28. МУК 4.1.3608-20 "Многокомпонентное определение остаточных количеств пестицидов различных химических классов при совместном присутствии в зерне хлебных злаков хроматографическими методами".

29. МУК 4.1.3657-20 "Многокомпонентное определение остаточных количеств пестицидов различных химических классов в цитрусовых хроматографическими методами".

30. СТБ EN 15662-2017 "Продукция пищевая растительного происхождения. Определение остатков пестицидов с применением ГХ-МС и/или ЖХ-МС/МС после экстракции/разделения ацетонитрилом и очистки с применением дисперсионной ТФЭ. Метод QuEChERS".

31. SANTE/11312/2021 "Analytical Quality control and method validation procedures for pesticide residues analysis in food and feed".

32. CAC/GL 41-1993 Analysis of Pesticide Residues: Portion of Commodities to which Codex MRLS Apply and which is Analyzed.

33. BS EN 15662:2018 Foods of plant origin - Multimethod for the determination of pesticide residues using GC- and LC-based analysis following acetonitrile extraction/partitioning and clean-up by dispersive SPE-Modular QuEChERS-method; English version EN 15662:2018.

34. Quick Method for the Analysis of Highly Polar Pesticides in Food Involving Extraction with Acidified Methanol and LC- or IC-MS/MS Measurement I. Food of Plant Origin (QuPPe-PO-Method).