Методические указания по методам контроля МУК 4.2.4063-24 "Организация и проведение исследований материалов из объектов окружающей среды на полиовирусы, неполиоэнтеровирусы" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 27 сентября 2024 г.)

Методические указания по методам контроля МУК 4.2.4063-24
"Организация и проведение исследований материалов из объектов окружающей среды на полиовирусы, неполиоэнтеровирусы"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 27 сентября 2024 г.)

Взамен МУК 4.2.2357-08

Дата введения 27 декабря 2024 г.

I. Область применения

1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее - МУК) описывают порядок сбора, упаковки, хранения, транспортирования и проведения лабораторных исследований материалов из объектов окружающей среды в целях слежения за циркуляцией полиовирусов, неполиоэнтеровирусов (далее - НПЭВ) среди населения ¹.

------------------------------

¹Глава XXXII СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней", утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 4 (зарегистрировано Минюстом России 15.02.2021, регистрационный N 62500), с изменениями, внесенными постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 11.02.2022 N 5 (зарегистрировано Минюстом России 01.03.2022, регистрационный N 67587); от 25.05.2022 N 16 (зарегистрировано Минюстом России 21.06.2022, регистрационный N 68934) (далее - СанПиН 3.3686-21); План действий по поддержанию свободного от полиомиелита статуса Российской Федерации на 2022 - 2024 гг., утвержденный руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека/Министром здравоохранения Российской Федерации 02.02.2022 (далее - План действий на 2022 - 2024 гг.).

------------------------------

1.2. Настоящие МУК предназначены для специалистов органов и организаций, осуществляющих федеральный государственный санитарно-эпидемиологический контроль (надзор) в отношении полиомиелита, а также могут быть использованы специалистами научно-исследовательских и медицинских организаций (далее - МО) в целях обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия по полиомиелиту.

II. Общие положения

2.1. Исследования материалов из объектов окружающей среды (далее - ООС) на полиовирусы, НПЭВ являются элементом системы эпидемиологического надзора за полиомиелитом, осуществляемого в рамках реализации Национального плана действий по поддержанию свободного от полиомиелита статуса Российской Федерации ².

2.2. Основной целью исследований материалов из ООС является получение данных о циркуляции полиовирусов среди населения ³. При проведении исследований достоверно подтверждается наличие или отсутствие полиовирусов в каждой пробе и определяется происхождение каждого выделенного полиовируса (дикий (далее - ДПВ), вакцинного происхождения 1, 2, 3 типов (далее - ПВВП), вакциноподобные - подобные штаммам Сэбина 1, 2, 3 типов или штамму, входящему в состав новой оральной полиовирусной вакцины типа 2 (далее - нОПВ2).

2.3. Объектом исследования при мониторинге за циркуляцией полиовирусов среди населения являются неочищенные сточные воды, образующиеся в процессе хозяйственной деятельности населения ⁴.

2.4. В связи с широкой циркуляцией НПЭВ (включая бессимптомные формы) среди населения, идентификация НПЭВ в пробах сточных вод в рамках эпидемиологического надзора за полиомиелитом является второстепенной задачей ⁵.

2.5. Исследование проб сточных вод позволяет установить связь полиовируса, выделяемого неизвестными лицами в сточные воды, с группой населения, которая обслуживается соответствующей частью системы канализации ⁶.

------------------------------

² План действий на 2022 - 2024 гг.

³Пункт 2526 СанПиН 3.3686-21.

⁴Пункты 2529, 2641 СанПиН 3.3686-21.

⁵ ВОЗ. Руководство по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде, 2003: fcgie.ru/page,6,koord_tsentr.html (в свободном доступе), (далее - ВОЗ. Руководство по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде, 2003).

⁶ ВОЗ. Руководство по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде, 2003.

------------------------------

2.6. Частота обнаружения полиовирусов, НПЭВ в пробах сточных вод является одним из критериев эффективности проведения мониторинга. В странах умеренного климата она может составлять 30 % и более и зависит от следующих факторов: места отбора проб, времени отбора проб, кратности отбора проб, условий доставки проб в лабораторию, метода концентрирования, метода исследования, наличия в пробе химических факторов, влияющих на выживаемость вируса [1, 2, 3]. Наибольшая концентрация полиовирусов и НПЭВ в сточных водах достигается в период пиковой нагрузки на канализационную сеть. В летнее время необходимо учитывать температуру окружающей среды, поскольку вирус быстрее деактивируется при нагревании ⁷.

2.7. При использовании в рамках национального календаря профилактических прививок и календаря профилактических прививок по эпидемическим показаниям ⁸ для иммунизации против полиомиелита оральной полиовирусной вакцины (далее - ОПВ), вакциноподобные (вакцинные) полиовирусы могут выделяться из проб сточной воды в течение всего года, наиболее интенсивно - во время проведения дополнительных мероприятий по иммунизации с применением ОПВ ⁹.

III. Отбор проб сточных вод при плановом мониторинге за циркуляцией полиовирусов среди населения

3.1. Выбор точек и места отбора проб осуществляется в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями ¹⁰. На каждую точку, включенную в программу ¹¹ планового мониторинга за циркуляцией полиовирусов среди населения, оформляется паспорт (приложение 1 к настоящим МУК).

3.2. Рекомендованный размер группы населения, которую охватывает точка отбора проб сточных вод, составляет 100 - 300 тыс. человек ¹².

------------------------------

⁷ ВОЗ. Полевое руководство по проведению надзора за полиовирусом в окружающей среде, 2023 (англ. WHO. Field guidance for the implementation of environmental surveillance for poliovirus, 2023 - polioeradication.org (в свободном доступе) (далее - ВОЗ. Полевое руководство по проведению надзора за полиовирусом в окружающей среде, 2023).

⁸Приказ Минздрава России от 06.12.2021 N 1122н "Об утверждении национального календаря профилактических прививок, календаря профилактических прививок по эпидемическим показаниям и порядка проведения профилактических прививок" (зарегистрирован Минюстом России 20.12.2021, регистрационный N 66435).

⁹ ВОЗ. Полевое руководство по проведению надзора за полиовирусом в окружающей среде, 2023.

¹⁰Пункты 2528, 2529, 2641 СанПиН 3.3686-21.

¹¹Пункты 2527, 2528, 2530, 2639, 2640, 2642 СанПиН 3.3686-21.

¹² ВОЗ. Полевое руководство по проведению надзора за полиовирусом в окружающей среде, 2023.

------------------------------

3.2.1. Если точка охватывает группу населения менее 100 тыс. человек, и рядом расположены другие точки отбора проб сточных вод, и пробы в этих рядом расположенных точках отбираются одномоментным способом (см. п. 5.1.1), допускается возможность исследования объединенных проб ¹³.

3.2.2. Если точка охватывает группу населения больше 300 тыс. человек, соответствующее снижение результативности мониторинга можно компенсировать более частым отбором проб ¹⁴.

3.3. Большой объем сточных вод, поступающих на очистные сооружения, в канализационный коллектор, может снизить результативность исследований вследствие фактора разбавления. Поэтому в крупных городах можно разбить ¹⁵ охватываемое население на группы и отбирать пробы на объектах, охватывающих эти группы, например, на социально значимых объектах ¹⁶.

3.4. Исследования сточных вод в рамках производственного контроля не соответствуют цели мониторинга за циркуляцией полиовирусов среди населения. Точки отбора проб сточных вод в рамках производственного контроля в программу планового мониторинга за циркуляцией полиовирусов среди населения не включаются.

3.5. При необходимости введения в плановый мониторинг новой точки отбора сточных вод она проходит процедуру валидации в течение 6-12 месяцев до официального включения в программу планового мониторинга за циркуляцией полиовирусов среди населения.

3.6. Валидация включает анализ результативности исследований проб сточных вод в новой точке в течение первых шести месяцев после начала отбора проб ¹⁷.

3.6.1. Если в течение данного периода из проб, отобранных в новой точке, выделяются полиовирусы и НПЭВ, точка может быть включена в программу мониторинга на следующий год в качестве постоянной.

3.6.2. Если результаты исследований в течение первых 6 месяцев окажутся нулевыми, проводится оценка правильности выбора точки, кратности отбора проб, условий транспортирования проб, соблюдения алгоритма проведения лабораторных исследований. Выявленные нарушения корректируют, после чего, организуется дополнительный период наблюдения в течение шести месяцев. Если после истечения дополнительного периода наблюдения результативность исследований не улучшается, точку не включают в программу планового мониторинга.

------------------------------

¹³ ВОЗ. Руководство по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде, 2003.

¹⁴ ВОЗ. Руководство по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде, 2003.

¹⁵ ВОЗ. Руководство по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде, 2003.

¹⁶Пункт 2529 СанПиН 3.3686-21.

¹⁷ ВОЗ. Полевое руководство по проведению надзора за полиовирусом в окружающей среде, 2023.

------------------------------

3.7. Если точка, не прошедшая валидацию, охватывает популяцию, имеющую эпидемиологические риски ¹⁸, определяют новую точку в той же зоне обслуживания (административной территории). Если найти новое место отбора в той же зоне обслуживания невозможно, выбирают альтернативное место отбора проб с похожими эпидемиологическими рисками ¹⁹.

3.8. Отбор проб сточных вод в рамках планового мониторинга полиовирусов среди населения проводят в каждой точке в течение всего года в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями ²⁰.

3.9. При проведении плановой ²¹ паспортизации точек отбора проб сточных вод проводят оценку всех этапов мониторинга (от выбора точек на основании данных паспортов до выдачи результатов лабораторных исследований).

3.10. Если в течение 6-12 месяцев в точке отбора проб сточных вод, включенной в программу планового мониторинга, не выделяются полиовирусы или НПЭВ, необходимо провести оценку правильности выбора точки, кратности отбора проб, условий транспортирования проб, соблюдения алгоритма проведения лабораторных исследований, выявить причины низких результатов и осуществить корректирующие действия. Если в течение следующих 6 месяцев эффективность точки не улучшается, ее необходимо закрыть и валидировать новую точку отбора ²².

IV. Отбор проб из объектов окружающей среды по эпидемическим показаниям

4.1. При возникновении эпидемических показаний территориальные органы, осуществляющие федеральный государственный санитарно-эпидемиологический контроль (надзор), принимают меры по увеличению объемов лабораторных исследований проб из ООС ²³.

4.2. Эпидемическим показанием для увеличения объемов лабораторных исследований проб из ООС является выявление ДПВ, ПВВП любых типов или вакциноподобных полиовирусов типа 2 (как подобных штамму Сэбина типа 2, так и штамму, входящему в состав нОПВ2) (далее - ПВ типа 2) из любой пробы, в том числе единичной (клинический материал от больных полиомиелитом, острыми вялыми параличами (далее - ОВП), энтеровирусной (неполио) инфекцией, контактных с ними в очаге, сточная вода).

4.3. Кратность отбора проб сточных вод по эпидемическим показаниям увеличивается до не менее двух раз в неделю на весь период выделения ДПВ, ПВВП любых типов или ПВ типа 2 и на период 12 месяцев от даты отбора последней пробы положительной на ДПВ, ПВВП или ПВ типа 2.

------------------------------

¹⁸Пункт 2529 СанПиН 3.3686-21.

¹⁹ ВОЗ. Полевое руководство по проведению надзора за полиовирусом в окружающей среде, 2023.

²⁰Пункты 2530, 2642 СанПиН 3.3686-21.

²¹Пункт 2530 главы XXXII СанПиН 3.3686-21.

²² ВОЗ. Полевое руководство по проведению надзора за полиовирусом в окружающей среде, 2023.

²³ Пункты 2534, 2542 СанПиН 3.3686-21.

------------------------------

4.4. При выявлении эпидемиологических рисков, указывающих на возможное осложнение эпидемиологической ситуации в отношении энтеровирусной (неполио) инфекции, территориальными органами, осуществляющими федеральный государственный санитарно-эпидемиологический контроль (надзор), может быть принято решение о введении дополнительной точки отбора сточных вод и (или) об отборе проб из других ООС ²⁴.

V. Отбор, маркировка и транспортирование проб из объектов окружающей среды

5.1. Пробы отбирают одним из следующих методов:

5.1.1. Одномоментный ²⁵ - отбирают определенный объем воды в определенное время, или серию проб определенного объема в разное, заранее выбранное время, из которых затем составляют объединенную пробу. Рекомендованный объем пробы - от 1,0 до 1,5 л для неочищенной сточной воды ²⁶ и не менее 10 л воды из других ООС ²⁷. Рекомендованное время отбора должно соответствовать пиковой нагрузке на канализационную сеть.

5.1.2. Адсорбционный ²⁸ - пакет с сорбентом или марлевый тампон с помощью прочной лески закрепляют в токе сточной воды на срок от 3 до 7 суток или в соответствии с инструкцией производителя.

5.2. К отбору проб допускаются сотрудники, прошедшие обучение соответствующим процедурам отбора и имеющие защитные титры вируснейтрализующих антител к полиовирусам. Рекомендуется также вакцинация против столбняка, брюшного тифа, холеры, гепатита А ²⁹.

5.3. Отбор проб проводят с использованием средств индивидуальной защиты - защитная одежда (водоотталкивающие комбинезоны), резиновые сапоги, резиновые перчатки, защитные очки и респиратор (или защитный экран) ³⁰.

------------------------------

²⁴Пункт 2646 СанПиН 3.3686-21.

²⁵ ВОЗ. Полевое руководство по проведению надзора за полиовирусом в окружающей среде, 2023.

²⁶ ВОЗ. Руководство по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде, 2003.

²⁷МУК 4.2.2029-05 "Санитарно-вирусологический контроль водных объектов", утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 18.11.2005.

²⁸ ВОЗ. Руководство по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде, 2003.

²⁹ ВОЗ. Полевое руководство по проведению надзора за полиовирусом в окружающей среде, 2023.

³⁰ ВОЗ. Полевое руководство по проведению надзора за полиовирусом в окружающей среде, 2023.

------------------------------

5.4. Для отбора проб воды одномоментным способом используют одноразовые емкости. Емкости должны иметь винтовые крышки с наружной резьбой. Крышки должны предохранять содержимое емкости от протечек ^31.

5.5. Сразу после отбора проб одномоментным способом поверхность емкости, в которую была отобрана проба, протирают дезинфицирующим средством, маркируют (номер пробы), помещают в термоконтейнеры или термосы, обеспечивающие температурный режим плюс 4-8 °C.

5.6. Пробы, отобранные адсорбционным методом, помещают в емкость, предотвращающую протечки ³².

5.7. На каждую пробу оформляется акт отбора в двух экземплярах, с которым пробу доставляют в лабораторию. В акте отбора указывают место отбора, дату и время отбора (при одномоментном методе отбора проб) или дату и время установки сорбента, дату и время снятия сорбента (при адсорбционном методе отбора проб), данные сотрудника (ФИО, должность), проводившего отбор проб.

5.8. Пробы, отобранные одномоментным методом, доставляют в лабораторию в день отбора, адсорбционным методом - в день снятия пакета с сорбентом или марлевого тампона. При проведении исследований в других субъектах Российской Федерации пробы целесообразно доставить в течение 72 часов. При задержке отправки пробы хранят при температуре плюс 4-8 °C не более 72 часов. О задержке доставки уведомляют лабораторию-получателя.

VI. Обработка проб в лаборатории

6.1. Сразу после доставки материалов в лабораторию упаковочную коробку, термоконтейнер или термос распаковывают в отведенной для этого зоне, с соблюдением требований биологической безопасности ³³.

6.2. В зоне, где происходит распаковка, должны иметься емкость для мусора, тампоны, смоченные дезинфицирующим раствором, активным в отношении полиовирусов и НПЭВ, бокс микробиологической безопасности 2 класса (далее - БМБ 2 класса) ³⁴. Емкости с пробами помещаются на поднос или лоток, покрытый многослойной марлевой салфеткой, смоченной дезинфицирующим раствором. Персонал лаборатории использует маску, резиновые перчатки, халат, шапочку ³⁵.

------------------------------

³¹Пункт 2570 СанПиН 3.3686-21; ВОЗ. Руководство по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде, 2003.

³²Пункт 2570 СанПиН 3.3686-21; ВОЗ. Руководство по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде, 2003.

³³ ВОЗ. Руководство по лабораторным исследованиям на полиовирусы, 2004. (англ. WHO. Polio Laboratory Manual. 4th ed. 2004 - iris.who.int (в свободном доступе) (далее - ВОЗ. Руководство по лабораторным исследованиям на полиовирусы, 2004).

³⁴Пункт 334 СанПиН 3.3686-21; ВОЗ. Руководство по лабораторным исследованиям на полиовирусы, 2004.

³⁵ Пункт 337 СанПиН 3.3686-21.

------------------------------

6.3. При распаковке материалов в лаборатории проверяют полноту сопроводительных документов, соответствие сведений на этикетке и в направлении, оценивают и фиксируют в рабочих записях состояние поступивших проб ("удовлетворительное" или "неудовлетворительное", нарушения упаковки, целостность емкостей с пробами, протечки проб, соблюдение температурного режима). "Удовлетворительными" считают пробы, доставленные в достаточном объеме, с соблюдением температурного режима, без нарушения упаковки и протечки проб, без нарушений при заполнении документации.

6.4. Каждой пробе присваивают идентификационный номер, который сопровождает все документы и емкости (центрифужные пробирки, флаконы или пробирки с культурой клеток), относящиеся к данной пробе в процессе ее исследования и хранения в лаборатории, проводящей исследования.

6.5. Приготовление проб к исследованию проводят в течение 24-48 часов с момента получения проб. В данный период пробы хранят при температуре плюс 2-8 °C. Если обработка планируется позже 48 часов, то пробу, отобранную одномоментным способом, хранят при температуре не выше минус 20 °C. Пробы, отобранные адсорбционным способом, замораживанию не подлежат. Пробы сточной воды хранятся отдельно от клинического материала.

6.6. Накопление проб в лаборатории и проведение ретроспективных исследований не допускается, так как это приводит к несвоевременным противоэпидемическим (профилактическим) мероприятиям в случаях, выделения из проб ДПВ, ПВВП любого типа, ПВ типа 2.

6.7. Для предотвращения перекрестной контаминации необходимо исключить одновременную обработку проб из ООС и проб, полученных в рамках эпидемиологического надзора за синдромом ОВП и от детей из "групп риска" ³⁶. Рекомендуется проводить обработку проб из ООС и проб, полученных в рамках эпидемиологического надзора за синдромом ОВП и от детей из "групп риска", в разных помещениях. Если такая возможность отсутствует, обработку проб из ООС и проб, полученных в рамках эпидемиологического надзора за синдромом ОВП и от детей из групп риска, разделяют по времени. Между процедурами проводят обеззараживание рабочих поверхностей, оборудования и помещения в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями ³⁷ и методическими документами ³⁸.

------------------------------

³⁶Примечание: к "группам риска" относятся дети, прибывшие из эндемичных или неблагополучных по полиомиелиту стран (территорий), из семей мигрантов и кочующих групп населения, беженцы, вынужденные переселенцы.

³⁷Приложение 2 СанПиН 3.3686-21.

³⁸ МУ-287-ПЗ "Дезинфекция, предстерилизационная очистка и стерилизация изделий медицинского назначения", утвержденные Минздравом России 30.12.1998 (далее-МУ-287-113).

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Вместо слов "МУ-287-ПЗ" следует читать "МУ-287-113"

------------------------------

6.8. Концентрирование проб, отобранных одномоментным способом, проводят методом двухфазного разделения или мембранной фильтрации (приложение 2 к настоящим МУК).

6.8.1. При использовании метода двухфазного разделения пробы, отобранные одномоментным способом, делят на две части до концентрирования. Одну часть подвергают концентрированию, другую хранят при температуре не выше минус 20 °C для возможного повторного исследования.

6.8.2. При использовании метода мембранной фильтрации пробы, отобранные одномоментным способом, делят на две части после концентрирования. Одну часть берут в исследование, другую хранят при температуре не выше минус 20 °C для возможного повторного исследования.

6.9. Концентрирование проб, отобранных адсорбционным методом, проводят в соответствии с инструкцией производителя.

VII. Исследование проб из объектов окружающей среды

7.1. Исследования проводят в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями ³⁹, при выполнении лабораторных исследований применяются средства измерений, вспомогательное и испытательное оборудование, расходные материалы и реактивы в соответствии с приложением 5 к настоящим МУК.

7.2. Исследованию подлежат концентраты проб. Перед началом исследований одну четверть концентрата пробы (1-3 мл) замораживают и хранят при температуре не выше минус 20 °C, кроме элюатов, полученных с сорбентов. Замораживание элюатов, полученных с сорбентов, до заражения культуры клеток не допускается.

7.3. Основной метод проведения исследований - вирусологический (изоляция вирусов на культурах клеток).

7.4. Метод полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (далее - ОТ-ПЦР) может быть использован как основной при отсутствии условий для проведения вирусологических исследований (отсутствие вирусологической лаборатории и (или) вирусолога) в учреждениях, обеспечивающих деятельность территориальных органов, осуществляющих федеральный государственный санитарно-эпидемиологический контроль (надзор) ⁴⁰.

------------------------------

³⁹Пункты 2531, 2532, 2643, 2644 СанПиН 3.3686-21.

⁴⁰ Пункт 2456 СанПиН 3.3686-21.

------------------------------

7.5. Проведение исследований проб из ООС методом ОТ-ПЦР осуществляют тест-системами, зарегистрированными и разрешенными к применению в Российской Федерации в установленном порядке ⁴¹, в соответствии с методическими документами ⁴² и инструкциями производителей. Интерпретация результатов исследований проб из ООС, проведенных методом ОТ-ПЦР, выполняется в соответствии с инструкциями производителей.

7.6. Алгоритм проведения вирусологического исследования приведен в приложении 3 к настоящим МУК. Вирусологическое исследование с предоставлением результатов проводится в течение 15-21 дней ⁴³ с момента поступления пробы в лабораторию.

7.7. Изоляты полиовирусов (приложение 3 к настоящим МУК) доставляют в Национальную лабораторию по диагностике полиомиелита (далее - НЛДП) от момента получения результата с предварительным уведомлением ⁴⁴. Изоляты целесообразно доставлять в течение 72 часов. При выделении смеси полиовирусов и НПЭВ в НЛДП направляют неразделенный изолят. Каждый изолят или смесь сопровождается документом, который содержит сведения о лаборатории-отправителе (фамилия ответственного лица, адрес, телефон, электронный адрес), дате, месте и способе отбора пробы, культуре, на которой был выделен изолят, результаты предварительной идентификации, если проводилась.

7.8. Исследования проб из ООС методом ОТ-ПЦР в лабораториях, где отсутствуют условия для проведения вирусологических исследований (см. п. 7.4), проводят в течение 24 часов от момента обработки пробы в лаборатории.

7.9. При получении положительного результата исследования методом ОТ-ПЦР учреждения, указанные в п. 7.4, направляют материал на дальнейшие исследования в зависимости от полученного результата:

7.9.1. При обнаружении РНК полиовирусов или энтеровирусов группы С независимо от значения Ct концентраты проб доставляют в течение 72 часов от момента получения результата в Региональный центр по эпидемиологическому надзору за полиомиелитом и ОВП (далее - РЦ ПОЛИО/ОВП), за которым закреплен субъект Российской Федерации, с предварительным уведомлением ⁴⁵.

------------------------------

⁴¹Часть 4 статьи 38 Федерального закона от 21.11.2011 N 323-ФЗ "Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации" (далее - Федеральный закон от 21.11.2011 N 323-ФЗ); постановление Правительства Российской Федерации от 27.12.2012 N 1416 "Об утверждении Правил государственной регистрации медицинских изделий" (далее - постановление Правительства Российской Федерации от 27.12.2012 N 1416).

⁴²МУ 1.3.2569-09 "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащем микроорганизмы I-IV групп патогенности", утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 22.12.2009 (далее - МУ 1.3.2569-09).

⁴³Пункт 2486 СанПиН 3.3686-21.

⁴⁴Пункт 2450 СанПиН 3.3686-21.

⁴⁵Пункт 2456 СанПиН 3.3686-21.

------------------------------

7.9.2. При обнаружении РНК энтеровирусов, не относящихся к группе С или полиовирусам, материал может быть направлен на идентификацию методом молекулярного типирования в референс-центр по мониторингу за энтеровирусными инфекциями, на базе ФБУН ННИИЭМ им. академика И.Н. Блохиной Роспотребнадзора (далее - референс-центр по мониторингу за энтеровирусными инфекциями), Дальневосточный региональный научно-методический центр по изучению энтеровирусных инфекций, на базе ФБУН Хабаровский НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора или Урало-Сибирский региональный научно-методический центр по изучению энтеровирусных инфекций, на базе ФБУН ФНИИВИ "Виром" Роспотребнадзора ⁴⁶ (далее - Дальневосточный или Урало-Сибирский региональные научно-методические центры по изучению энтеровирусных инфекций) по предварительному согласованию (сроки, количество, вид направляемого материала и значение Ct).

7.10. Для любых проб из ООС, исследованных методом ОТ-ПЦР, в сопровождающем документе указывают дату проведения исследования, наименование использованных тест-систем, значение Ct для каждой использованной тест-системы, место отбора, дату и время отбора (при одномоментном методе отбора проб) или дату и время установки сорбента, дату и время снятия сорбента (при адсорбционном методе отбора проб).

7.11. РЦ ПОЛИО/ОВП при получении из закрепленного субъекта Российской Федерации материала из ООС, в котором обнаружена РНК полиовирусов или энтеровирусов группы С, проводят вирусологическое исследование (приложение 3 к настоящим МУК). При выделении изолята полиовируса, в том числе в виде смеси с НПЭВ, целесообразно доставлять его в течение 72 часов в НЛДП с предварительным уведомлением. При выделении смеси полиовирусов и НПЭВ в НЛДП направляют неразделенный изолят. Каждый изолят сопровождается документом, оформленным в соответствии с п. 7.7.

7.12. Все материалы независимо от метода исследования при получении положительного результата хранят в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями ⁴⁷ до получения окончательного результата из лаборатории, проводящей идентификацию (для полиовирусов - из НЛДП, для НПЭВ - из референс-центра по мониторингу за энтеровирусными инфекциями, Дальневосточного или Урало-Сибирского региональных научно-методических центров по изучению энтеровирусных инфекций) и после получения окончательного результата обеззараживают в автоклаве и утилизируют в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями ⁴⁸, а также

------------------------------

⁴⁶Приказ Роспотребнадзора от 01.12.2017 N 1116 "О совершенствовании системы мониторинга, лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней и индикации ПБА в Российской Федерации" (далее - приказ Роспотребнадзора от 01.12.2017 N 1116); приказ Роспотребнадзора от 19.12.2016 N 1236 "О совершенствовании эпидемиологического надзора за ЭВИ" (далее - приказ Роспотребнадзора от 19.12.2016 N 1236).

⁴⁷Пункт 2556 СанПиН 3.3686-21.

⁴⁸ Глава IV, таблица 7 приложения 2 СанПиН 3.3686-21.

------------------------------

методическими документами ⁴⁹, за исключением специальных распоряжений по хранению.

7.12.1. При получении результата внутритиповой дифференциации (далее - ВТД), указывающего на содержание в пробе ДПВ, ПВВП любого типа, ПВ типа 2, все материалы (исходная проба, изолят) по согласованию с НЛДП обеззараживаются и утилизируются в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями ⁵⁰, а также методическими документами ⁵¹ или передаются в НЛДП, материалы целесообразно обеззараживать, утилизировать или направлять в НЛДП в течение 72 часов с момента получения результата ВТД.

7.13. НЛДП, РЦ ПОЛИО/ОВП, референс-центр по мониторингу за энтеровирусными инфекциями, Дальневосточный или Урало-Сибирский региональные научно-методические центры по изучению энтеровирусных инфекций передают результаты исследований в учреждения, обеспечивающие деятельность территориальных органов, осуществляющих федеральный государственный санитарно-эпидемиологический контроль (надзор), которые направляли материал. Результаты исследований рекомендуется направлять в течение 24 часов с момента их получения.

7.14. При получении результатов ВТД, указывающих на принадлежность полиовируса к ДПВ, ПВВП любых типов, ПВ типа 2, в том числе в виде смеси с вакцинными полиовирусами 1 и (или) 3 типов, и (или) НПЭВ:

- НЛДП сообщает об этом в Координационный центр профилактики полиомиелита и энтеровирусной (неполио) инфекции и РЦ ПОЛИО/ОВП;

- учреждение, проводившее первоначальные исследования, сообщает об этом в территориальный орган, осуществляющий федеральный государственный санитарно-эпидемиологический контроль (надзор).

VIII. Идентификация изолятов полиовирусов, НПЭВ и внутритиповая дифференциация полиовирусов

8.1. Идентификацию выделенных L20B+ изолятов (определение их принадлежности к полиовирусам или НПЭВ) и ВТД полиовирусов проводит НЛДП методом ОТ-ПЦР.

8.2. Для идентификации изолятов полиовирусов могут быть использованы тест-системы для проведения исследований методом ОТ-ПЦР, зарегистрированные и разрешенные к применению в Российской Федерации в установленном порядке ⁵².

8.3. ВТД полиовирусов проводится в течение 5 дней от момента получения изолята.

8.4. В случае получения результатов ВТД, указывающих на принадлежность полиовируса к ДПВ, ПВВП любых типов, ПВ типа 2, в том числе в виде смеси с вакцинными полиовирусами 1 и (или) 3 типов, и (или) НПЭВ, НЛДП в течение 7 дней от момента получения результатов проводит секвенирование участка генома белка VP1 изолята полиовируса.

------------------------------

⁴⁹МУ-287-113.

⁵⁰Глава IV, таблица 7 приложения 2 СанПиН 3.3686-21.

⁵¹МУ-287-113.

⁵²Часть 4 статьи 38 Федерального закона от 21.11.2011 N 323-ФЗ; постановление Правительства Российской Федерации от 27.12.2012 N 1416.

------------------------------

8.5. Идентификация изолятов НПЭВ (установление типа) может быть выполнена с помощью молекулярно-генетического или серологического метода (в реакции нейтрализации на культуре клеток микрометодом).

8.5.1. Метод молекулярного типирования применяют в соответствии с методическими документами ⁵³. Изоляты НПЭВ могут быть направлены на идентификацию методом молекулярного типирования в референс-центр по мониторингу за энтеровирусными инфекциями, Дальневосточный или Урало-Сибирский региональные научно-методические центры по изучению энтеровирусных инфекций по предварительному согласованию ⁵⁴ (сроки, количество, вид направляемого материала).

8.5.2. Для серологического метода используются иммунные к НПЭВ сыворотки, зарегистрированные и разрешенные к применению в Российской Федерации в установленном порядке ⁵⁵. Подготовку рабочих разведений сывороток, проведение теста микронейтрализации, интерпретацию результатов проводят в соответствии с инструкцией производителя. Типирование НПЭВ проводят на той культуре, на которой он был выделен.

IX. Техника безопасности при работе с материалами, инфицированными или потенциально инфицированными полиовирусом

9.1. Мероприятия по обеспечению биологической безопасности при проведении исследований проб из ООС на полиовирусы организуются в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями ⁵⁶ а также методическими документами ⁵⁷.

9.2. К работе допускаются сотрудники, имеющие защитные титры вируснейтрализующих антител к полиовирусам. Иммунизация лиц, работающих с материалом, инфицированным или потенциально инфицированным ДПВ, ПВВП любого типа, ПВ типа 2, проводится в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями ⁵⁸.

9.3. Все используемое лабораторное оборудование должно иметь инструкции по эксплуатации. Учтенные экземпляры инструкций хранятся раздельно в специальных местах в помещении "чистой зоны". Допустимо использование инструкций на бумажных и (или) электронных носителях.

------------------------------

⁵³МР 4.2.0327-23 "Молекулярное типирование энтеровирусов", утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 06.06.2023; пункт 3.1 приложения 3 МУ 3.1.1.4015-24 "Эпидемиологический надзор за энтеровирусной (неполио) инфекцией", утвержденных руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 18.03.2024.

⁵⁴Пункт 2.2 приказа Роспотребнадзора от 01.12.2017 N 1116.

⁵⁵Часть 4 статьи 38 Федерального закона от 21.11.2011 N 323-ФЗ; постановление Правительства Российской Федерации от 27.12.2012 N 1416.

⁵⁶Глава IV, пункты 2545-2571, приложения 2, 3 СанПиН 3.3686-21.

⁵⁷МУ-287-113.

⁵⁸Пункты 2499, 2500 СанПиН 3.3686-21.

------------------------------

9.4. Контейнеры из-под первичного материала, использованная одноразовая посуда, наконечники микропипеток, микротитровальные планшеты, пипетки и прочие расходные материалы во время проведения работ собирают в емкости, предназначенные для сбора отходов класса Б. После окончания работ - обеззараживают в автоклаве и утилизируют в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями ⁵⁹, а также методическими документами ⁶⁰. Стеклянную посуду обеззараживают дезинфицирующими средствами с вирулицидной активностью в отношении полиовирусов ⁶¹, зарегистрированными и разрешенными к применению в Российской Федерации в установленном порядке ⁶².

9.5. Обеззараживание рабочих поверхностей, оборудования проводят дезинфицирующими средствами с вирулицидной активностью в отношении полиовирусов и последующей обработкой ультрафиолетом в соответствии с методическими документами ⁶³.

9.6. Для снижения риска распространения ДПВ, ПВВП любого типа, ПВ типа 2 соблюдают следующие правила:

- использование ДПВ, ПВВП любого типа, ПВ типа 2 прекращается во всех случаях, где ту же задачу можно выполнить при помощи аттенуированных вакцинных штаммов типа 1 и 3, инактивированных антигенов или НПЭВ;

- во всех случаях, когда отсутствует необходимость хранения полиовирусов, все запасы вирусов и потенциально инфицированных ими материалов обеззараживают в автоклаве и утилизируют в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями ⁶⁴, а также методическими документами ⁶⁵.

9.7. При приготовлении и титровании референс-штаммов полиовирусов (вакцинных штаммов Сэбина) (далее - референс-штаммы) (см. приложение 4 к настоящим МУК) одновременно работают только с вирусом одного типа. Оптимальным является работа с вирусом каждого типа в отдельные дни.

------------------------------

⁵⁹Глава IV, таблица 7 приложения 2 СанПиН 3.3686-21.

⁶⁰МУ-287-113.

⁶¹Приложение 2 СанПиН 3.3686-21.

⁶²Раздел II Единого перечня продукции (товаров), подлежащей государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза, утвержденного решением Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299, с изменениями, внесенными решениями Комиссии Таможенного союза от 17.08.2010 N 341, от 20.09.2010 N 383, от 14.10.2010 N 432, от 18.11.2010 N 456, от 02.03.2011 N 566, от 18.10.2011 N 828, от 09.12.2011 N 859, решениями Совета Евразийской экономической комиссии от 15.06.20212 N 36, от 24.08.2012 N 73, от 17.12.2012 N 115, от 18.09.2014 N 78, от 02.12.2015 N 82, от 14.06.2018 N 64, от 22.02.2019 N 8, от 09.09.2019 N 97, от 04.09.2020 N 65, от 29.10.2021 N 109, от 18.02.2022 N 15, от 17.03.2022 N 28, от 25.01.2023 N 6, от 14.05.2024 N 51.

⁶³Р 3.5.1.4025-24 "Использование ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха в помещениях", утвержденное руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 31.05.2024.

⁶⁴Глава IV, таблица 7 приложения 2 СанПиН 3.3686-21.

⁶⁵МУ-287-113.

------------------------------

Нормативные и методические документы

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Федеральный закон от 21.11.2011 N 323-ФЗ "Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации".

3. Постановление Правительства Российской Федерации от 27.12.2012 N 1416 "Об утверждении Правил государственной регистрации медицинских изделий".

4. Единый перечень продукции (товаров), подлежащей государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза.

5. План действий по поддержанию свободного от полиомиелита статуса Российской Федерации на 2022 - 2024 гг.

6. СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней".

7. Приказ Роспотребнадзора от 01.12.2017 N 1116 "О совершенствовании системы мониторинга и лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней и индикации ПБА в Российской Федерации".

8. Приказ Роспотребнадзора от 19.12.2016 N 1236 "О совершенствовании эпидемиологического надзора за ЭВИ".

9. Приказ Минздрава России от 06.12.2021 N 1122н "Об утверждении национального календаря профилактических прививок, календаря профилактических прививок по эпидемическим показаниям и порядка проведения профилактических прививок".

10. Р 3.5.1.4025-24 "Использование ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха в помещениях".

11. МУ 3.1.1.4015-24 "Эпидемиологический надзор за энтеровирусной (неполио) инфекцией".

12. МУ 1.3.2569-09 "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащем микроорганизмы I - IV групп патогенности".

13. МУ-287-113 "Дезинфекция, предстерилизационная очистка и стерилизации изделий медицинского назначения".

14. МУК 4.2.2029-05 "Санитарно-вирусологический контроль водных объектов".

15. МР 4.2.0327-23 "Молекулярное типирование энтеровирусов".

Библиографические ссылки

1. Battistone A., Buttinelli G., Bonomo P., Fiore S., Amato C., Mercurio P., Cicala A., Simeoni J., Foppa A., Triassi M. et al. Detection of enteroviruses in influent and effluent flow samples from wastewater treatment plants in Italy. Food Environ. Virol. 2014, 6, 13-22.

2. Bisseux M., Debroas D., Mirand A., Archimbaud C., Peigue-Lafeuille H., Bailly J.-L. Henquell C. Monitoring of enterovirus diversity in wastewater by ultra-deep sequencing: An effective complementary tool for clinical enterovirus surveillance. Water Res. 2020, 169, 115246.

3. Ivanova O.E., Yarmolskaya M.S., Eremeeva T.P., Babkina G.M., Baykova O.Y., Akhmadishina L.V., Krasota A.Y., Kozlovskaya L.I., Lukashev A.N. Environmental Surveillance for Poliovirus and Other Enteroviruses: Long-Term Experience in Moscow, Russian Federation, 2004-2017. Viruses. 2019 May 8; 11 (5).